تأثير الإبر الكهربائية على تعبير بروتين Nur77 وTRAF2 والتحلل الذاتي للبلاعم في أنسجة الرئة لفئران مرض الانسداد الرئوي المزمن
ZHANG Zhen
,
FANG Danqun
,
YIN Xiuwen
,
LIU Na
,
ZHANG Xinfang
,
XIANG Shuiying
,
LIU Zibing
,
DOI:
摘要
الهدف هو مراقبة ما إذا كان بالإمكان للإبر الكهربائية أن تؤثر عبر تنظيم تعبير مستقبلات النووية 77 (Nur77) وانتقالها من النواة إلى السيتوبلازم، مما يؤثر على التفاعل بين Nur77 وعامل مستقبل TNF المرتبط 2 (TRAF2)، وبالتالي تثبيط الإفراط في التحلل الذاتي للبلاعم في أنسجة الرئة، وتحسين الاستجابة الالتهابية للرئة في فئران مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD). الطريقة تم اختيار 40 فأر ذكر من نوع C57BL/6 بدرجة SPF، تم اختيار 10 منها عشوائياً كمجموعة ضابطة، وتم تعريض 30 المتبقية لدخان السجائر لمدة 3 أشهر لنمذجة فئران COPD. بعد تأكيد نجاح إنشاء نموذج الحيوانات، تم تقسيم الفئران التجريبية عشوائياً إلى ثلاث مجموعات: مجموعة النموذج، مجموعة الإبر الكهربائية، ومجموعة المضاد + الإبر الكهربائية، مع 10 فئران في كل مجموعة. تم تقديم التدخل بالإبر الكهربائية على الجانبين عند نقاط "Feishu" و"Zusanli" يومياً لمدة 20 دقيقة لكل جلسة ولمدة 14 يوماً لمجموعتي الإبر الكهربائية والمضاد + الإبر الكهربائية. تم حقن مضاد Nur77 المعروف بـ DIM-C-pPhOH (25 ملغ/كجم) في التجويف البطني قبل 30 دقيقة من كل جلسة إبر كهربائية يومياً لمدة 14 يوماً في مجموعة المضاد + الإبر الكهربائية. تم استخدام جهاز تحليل وظيفة التنفس للحيوانات لفحص وظيفة الرئة، وتم استخدام صبغة HE لمراقبة التغيرات المرضية في أنسجة الرئة؛ تم قياس محتوى السيتوكينات IL-6 وIL-1β وTNF-α في السائل المنخاري الرئوي المُغسَل (BALF) بواسطة ELISA؛ وتم قياس نشاط إنزيم SOD وكمية MDA في نسيج الرئة بطريقة تلوين دقيقة؛ ومن خلال Western blot تم قياس تعبير Nur77 (البروتين النووي والبروتين السيتوبلازمي)، TRAF2، LC3، وبروتين P62؛ تم تقييم مستويات تعبير mRNA لـ Nur77 وTraf2 عبر PCR الكمي اللحظي والتفاعل المرون؛ واستخدم التراكب المناعي المشترك (Co-IP) لتحليل التفاعل بين Nur77 وTRAF2؛ واستخدم المجهر الإلكتروني الناقل لمراقبة التغيرات في الأجسام الذاتية داخل البلاعم الرئوية. النتائج، مقارنة مع المجموعة الضابطة، أظهرت مجموعة النموذج انخفاضًا ملحوظًا في معايير وظيفة التنفس (P<0.05، P<0.01)، مع سماكة واضحة في جدران الحويصلات الهوائية وتكوين تراكيب فقاعية كبيرة مع اندماج العديد من الحويصلات الهوائية، بالإضافة إلى تسلل واسع للخلايا الالتهابية. كما أظهرت تحاليل BALF زيادة ملحوظة في عوامل الالتهاب IL-6 وIL-1β وTNF-α، ونشاط SOD في أنسجة الرئة انخفض بشكل ملحوظ بينما زاد محتوى MDA (P<0.01). كما ارتفعت نسبة LC3II/LC3I بشكل ملحوظ (P<0.05)، في حين انخفض تعبير بروتين P62 (P<0.01) ومستوى بروتين TRAF2 (P<0.01)، مع زيادة تعبير Nur77 في النواة وانخفاضه في السيتوبلازم (P<0.01). بالإضافة إلى ذلك، انخفض مستوى نسخ جين Nur77 (P<0.01) في حين زاد مستوى نسخ Traf2 (P<0.05)، وتناقص الترابط النسبي بين Nur77 وTRAF2 (P<0.01). أظهر الفحص بالمجهر الإلكتروني زيادة كبيرة في أعداد الأجسام الذاتية داخل البلاعم. مقارنة مع مجموعة النموذج، أظهرت مجموعة الإبر الكهربائية تحسنًا ملحوظًا في هذه المؤشرات (P<0.05، P<0.01)، مع زيادة ملحوظة في نشاط SOD (P<0.01)، وانخفاض ملحوظ في محتوى MDA (P<0.05)؛ وانخفاض نسبة LC3II/LC3I (P<0.01)، وزيادة تعبير بروتين P62 (P<0.01) وانخفاض مستوى TRAF2 (P<0.05). كما انخفض تعبير Nur77 في النواة وازداد في السيتوبلازم (P<0.05، P<0.01)؛ مع ارتفاع تعبير mRNA لـ Nur77 وانخفاض تعبير mRNA لـ Traf2 (P<0.05). كما ارتفع الترابط النسبي بين Nur77 وTRAF2 (P<0.05)، وانخفضت أعداد الأجسام الذاتية داخل البلاعم بشكل ملحوظ. مقارنة مع مجموعة الإبر الكهربائية، شهدت مجموعة المضاد + الإبر الكهربائية عكسًا في كل هذه المؤشرات (P<0.05،P<0.01). الخلاصة، يمكن للإبر الكهربائية أن تحسن التعبير عن Nur77 وتعزز انتقاله من النواة إلى السيتوبلازم، وتقوي التفاعل بين Nur77 وTRAF2، وتنظم بروتينات ذات صلة بالتحلل الذاتي، مما يثبط الإفراط في تحلل البلاعم في الرئة ويخفف من الاستجابة الالتهابية للرئة في مرض COPD.
关键词
الإبر الكهربائية; مرض الانسداد الرئوي المزمن; مستقبلات نووية 77; عامل مستقبل TNF المرتبط 2; تحلل بلاعم ذاتي