Untersuchung des Mechanismus der Moxibustion zur Verbesserung des Autophagieniveaus von Darmepithelzellen bei Ratten mit diarrhoischem Reizdarmsyndrom basierend auf dem PI3K / AKT / mTOR-Signalweg

WANG Ting ,  

SONG Xiao-ge ,  

RUAN Jing-ru ,  

HAN Xiao-yu ,  

WANG Yu-qing ,  

XIANG Ting-ting ,  

LI Kui-wu ,  

ZHU Jing-wei ,  

FANG Yu-cheng ,  

WANG Zi-ye ,  

CHU Hao-ran ,  

摘要

Ziel ist es, die Auswirkungen der Moxibustion auf den Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K) / Protein Kinase B (AKT) / mammalian target of rapamycin (mTOR) -Signalweg bei Ratten mit diarrhoischer Reizdarmsyndrom (IBS-D) zu untersuchen und die möglichen Mechanismen der Moxibustion zur Regulierung des Autophagieniveaus von Darmepithelzellen und zum Schutz der Darmmukosabarriere bei IBS-D-Ratten zu erforschen. Die 40 SD-Ratten wurden in eine Normalgruppe, eine Modellgruppe, eine Moxibustionsgruppe und eine Moxibustionsgruppe + LY294002-Gruppe randomisiert, jeweils mit 10 Ratten. Das IBS-D-Modell wurde durch Essigsäurereizung und chronischen Stress hergestellt. In der Moxibustionsgruppe wurden die Ratten bilateral mit Tianshu und Shangjuxu für 20 Minuten moxibustiert; in der Moxibustionsgruppe + LY294002-Gruppe wurden den Ratten 30 Minuten vor der Moxibustion intraperitoneal PI3K-Inhibitor LY294002 (0,75 mg / kg) verabreicht. Beide Gruppen wurden 7 Tage lang täglich behandelt. Vor der Modellherstellung, danach und nach der Behandlung wurden das minimale Wasservolumen bei einem abdominellen Zurückziehungsreflex (AWR) von 3 in den verschiedenen Gruppen gemessen; Entzündungsschädigungen der Kolonschleimhaut wurden mittels HE-Färbung untersucht; Die mitochondrialen Ultrastrukturen der Kolonschleimhaut und die Anzahl der autophagischen Vesikel wurden mit einem Transmissionselektronenmikroskop untersucht; Die Expression von Zellverbindungsproteinen (Occludin), der tight junction protein 1 (ZO-1), Claudin-2 und des p62-Proteins sowie das Verhältnis von p-PI3K / PI3K, p-AKT / AKT, p-mTOR / mTOR und des microtubule-associated protein light chain (LC) wurden mittels Western-Blotting untersucht 3B-II / I im Kolon; Der Expressionsniveau von PI3K, AKT, mTOR, Occludin, ZO-1, Claudin-2-MRNAs im Rattenkolon wurde mittels Echtzeit-PCR quantifiziert. Im Vergleich zur Normalgruppe zeigten die Ratten der Modellgruppe eine Abnahme des minimalen Wasservolumens für den AWR ( P & lt; 0,01), eine unregelmäßige Anordnung von Darmepithelzellen, sichtbare lokale Infiltration entzündlicher Zellen, mehrere autophagische Vesikel unter dem Elektronenmikroskop, ein niedrigeres Verhältnis von p-PI3K / PI3K, p-AKT / AKT, p-mTOR / mTOR sowie eine niedrigere Expression von Occludin, ZO-1 und p62-Protein, eine niedrigere mRNA-Expression von PI3K, AKT, mTOR, Occludin, ZO-1 ( P & lt; 0,01), eine höhere Expression von Claudin-2-Protein und -mRNA, ein höheres LC3B-II / I-Verhältnis ( P & lt; 0,01). Im Vergleich zur Modellgruppe zeigten die Ratten der Moxibustionsgruppe eine erhöhung des minimalen Wasservolumens für den AWR ( P & lt; 0,05), eine relativ intakte Darmmukosalstruktur, eine verringerte Entzündungszellinfiltration, eine verminderte Anzahl von autophagischen Vesikeln unter dem Elektronenmikroskop, ein höheres Verhältnis von p-PI3K / PI3K, p-AKT / AKT, p-mTOR / mTOR sowie eine höhere Expression von Occludin, ZO-1 und p62-Protein, eine höhere mRNA-Expression von PI3K, AKT, mTOR, Occludin, ZO-1 ( P & lt; 0,01), eine niedrigere Expression von Claudin-2-Protein und -mRNA, ein niedrigeres LC3B-II / I-Verhältnis ( P & lt; 0,01). Im Vergleich zur Moxibustionsgruppe zeigten die Ratten der Moxibustionsgruppe + LY294002 eine relativ gestörte Darmmukosastruktur, eine erhöhte Entzündungszellinfiltration, eine vermehrte Anzahl autophagischer Vesikel unter dem Elektronenmikroskop, und alle anderen Indikatoren wurden in unterschiedlichem Maße zurückgeführt ( P & lt; 0,01, P & lt; 0,05). Fazit Moxibustion aktiviert möglicherweise den PI3K / AKT / mTOR-Signalweg, verringert das Autophagieniveau von Darmepithelzellen bei IBS-D-Ratten und lindert so die Schädigung des Darmepithels und schützt die Darmmukosabarriere.

关键词

diarrhoisches Reizdarmsyndrom; Moxibustion; viszeraler Schmerz; Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K) / Protein Kinase B (AKT) / Säugetier-Ziel für Rapamycin (mTOR) -Signalweg; Darmmukosabarriere; Autophagie

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