Dank seiner Fähigkeit zur Durchdringung tiefer Gewebe, geringer Phototoxizität, hoher räumlicher Auflösung, Resistenz gegen Lichtstreuung und langer Arbeitsabstand hat sich das Zwei-Photonen-Mikroskop zu einem idealen Werkzeug für die Bildgebung von lebendem Gewebe, tiefen Strukturen und transparentisierten dicken Geweben entwickelt und wird weit verbreitet in der biomedizinischen Forschung eingesetzt. Allerdings befindet sich die Anwendung dieser Technologie in der Akupunkturforschung noch in den Anfängen. Angesichts des großen Potenzials der Zwei-Photonen-Mikroskopie in der Akupunkturforschung erörtert dieser Artikel systematisch die Prinzipien und technischen Vorteile der Technologie und gibt einen Überblick über die neuesten Anwendungsfortschritte im Bereich der Akupunktur. Gleichzeitig wird eine innovative Integrationsstrategie für die Akupunkturforschung vorgeschlagen, die die Integration von sekundärer Harmonischer Erzeugungsbildgebung, Optogenetik, Gen-Editing und Gewebetransparenztechnologien umfasst. Es werden ebenfalls konkrete Empfehlungen zur Gewinnung von hochwertigen Bildern mit dem Zwei-Photonen-Mikroskop gegeben, um die vertiefte Anwendung dieser Technologie in der Akupunkturforschung zu fördern, eine in vivo Echtzeit-Beobachtung der Akupunktureffekte zu ermöglichen und eine starke technische Unterstützung zur Aufklärung der Wirkmechanismen der Akupunktur bereitzustellen.