Das Zweiphotonenmikroskop hat sich aufgrund seiner Fähigkeit zur Tiefengewebspenetration, geringen Phototoxizität, hohen räumlichen Auflösung, Lichtstreuungsresistenz und langen Arbeitsabstand zu einem idealen Werkzeug für die Bildgebung lebender Gewebe, tiefer Strukturen und aufgeklärter dicker Gewebe entwickelt und wird breit in der biomedizinischen Forschung eingesetzt. Dennoch befindet sich die Anwendung dieser Technologie in der Akupunkturforschung noch in den Anfangsstadien. Angesichts des enormen Potenzials der Zweiphotonenmikroskopie in der Akupunkturforschung erläutert dieser Artikel systematisch die Prinzipien und technischen Vorteile der Technologie und gibt einen Überblick über die neuesten Anwendungen im Bereich der Akupunktur. Durch die Integration von Zweit-Harmonischen-Generierungs-Bildgebung, Optogenetik, Gen-Editing und Gewebeaufklärungstechnologien werden innovative Integrationsstrategien für die Akupunkturforschung vorgeschlagen. Zudem werden konkrete Empfehlungen zur Gewinnung hochqualitativer Bilddaten mit dem Zweiphotonenmikroskop gegeben. Ziel ist es, die tiefgreifende Anwendung dieser Technologie in der Akupunkturforschung zu fördern, die dynamische Echtzeitbeobachtung von Akupunktureffekten in vivo zu ermöglichen und eine starke technische Unterstützung zur Aufklärung der Wirkmechanismen der Akupunktur bereitzustellen.