Untersuchung des Wirkmechanismus der Nadelmesserkupunktur zur Hemmung des ferroptotischen Zelltods von Knorpelzellen basierend auf der Piezo1/GPX4/ACSL4-Signalachse

ZHANG Liang-zhi ,  

LIU Hong ,  

HUANG Wang-xiang ,  

LIU Wen-hui ,  

YU Wen-ying ,  

XIE Li-mei ,  

ZHENG Yu-kui ,  

ZENG Wei-yi ,  

XIU Zhong-biao ,  

摘要

Ziel war es, die Wirkung der Nadelmesserkupunktur auf die piezoelektrisch gesteuerten mechanischen Ionenkanäle 1 (Piezo1)/Glutathionperoxidase 4 (GPX4)/Langketten-Acyl-CoA-Synthetase 4 (ACSL4)-Signalachse der Knorpelzellen des Kniegelenks von Kaninchen mit Kniegelenkarthrose (KOA) zu beobachten und den Wirkmechanismus der Nadelmesserkupunktur zur Behandlung von KOA zu untersuchen. Methoden: Männliche Neuseeland-Kaninchen wurden zufällig in drei Gruppen eingeteilt: Kontrollgruppe, Modellgruppe und Nadelmesserkupunkturgruppe, jeweils 8 Tiere pro Gruppe. Ein KOA-Kaninchenmodell wurde durch Fixierung des linken Hinterbeins in Streckstellung über 6 Wochen mittels einer modifizierten Videman-Methode etabliert. In der Nadelmesserkupunkturgruppe wurden am linken Knie entlang der Meridiane die Läsionspunkte „Kranichgipfel“, „äußerer oberer Patella“, „innerer oberer Patella“, „zwischen Fibula“, „Weiyang-Punkt“ und „Yinling-Punkt“ ausgewählt. Die Nadelmesserkupunktur wurde einmal pro Woche 4 Wochen lang durchgeführt. Vor und nach der Intervention wurde der Lequesne MG-Funktionsstörungsindex des linken Kniegelenks der Kaninchen bewertet; pathologische Veränderungen der Knorpelzellen wurden mittels HE-Färbung beobachtet; die ultrastrukturelle Morphologie der Mitochondrien der Knorpelzellen wurde mittels Transmissions-Elektronenmikroskopie untersucht; die mRNA-Expressionslevel von Piezo1, GPX4 und ACSL4 im Knorpelgewebe wurden mittels Echtzeit-Fluoreszenz-Quantitativer PCR bestimmt; die Proteinexpression von Piezo1, GPX4 und ACSL4 wurde mittels Western Blot analysiert. Ergebnisse: Im Vergleich zur Kontrollgruppe zeigten Kaninchen in der Modellgruppe eine erhöhte Lequesne MG-Bewertung des linken Kniegelenks (P<0,01), erhöhte mRNA- und Proteinexpression von Piezo1 und ACSL4 (P<0,01), und reduzierte mRNA- und Proteinexpression von GPX4 (P<0,01, P<0,05). Im Vergleich zur Modellgruppe zeigte die Nadelmesserkupunkturgruppe eine Verringerung der Lequesne MG-Bewertung des linken Kniegelenks (P<0,05), verringerte mRNA- und Proteinexpression von Piezo1 und ACSL4 (P<0,01, P<0,05), und erhöhte mRNA- und Proteinexpression von GPX4 (P<0,01, P<0,05). Die HE-Färbung zeigte, dass die Knorpeloberfläche bei der Modellgruppe rau war, mit schrumpfenden, zerfallenden oder fehlenden Zellkernen, geringer Zellzahl, verstreuter Anordnung und unregelmäßiger Schichtung; in der Nadelmesserkupunkturgruppe war die Knorpeloberfläche glatter, die Zellkerne klarer, die Zellzahl erhöht, die Anordnung ordentlicher und die Schichtung gleichmäßiger. Die Übertragungselektronenmikroskopie zeigte, dass die Knorpelzellen in der Modellgruppe geschrumpft und unregelmäßig geformt waren, mit zerstörter Zellmembran, zahlreichen Vakuolen im Zytoplasma, runden oder ovalen Mitochondrien in verminderter Anzahl, ausgedehnter Matrixauflösung sowie verkürzten, unterbrochenen oder fehlenden Cristae; in der Nadelmesserkupunkturgruppe waren die Knorpelzellen regelmäßiger geformt, Membranen intakt, Zytoplasma homogener, Mitochondrien rund oder oval und in größerer Anzahl, Matrix homogener mit mehr Cristae. Fazit: Basierend auf der Meridian-Theorie könnte die Lösung der Meridian-Läsionspunkte um das Knie durch Nadelmesserkupunktur die Piezo1/GPX4/ACSL4-Signalachse regulieren, den ferroptotischen Zelltod der Knorpelzellen hemmen und die Knorpelschädigung bei KOA-Kaninchen verbessern.

关键词

Kniegelenkarthrose; Nadelmesserkupunktur; ferroptotischer Zelltod; Piezo1/GPX4/ACSL4-Signalachse

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