PI3K/AKTシグナル経路に基づく電気鍼足少陽経穴による閉経後骨粗鬆症ラットの炎症反応改善の作用機序の検討

LÜ Xing-min ,  

TANG Cai ,  

RONG Yi ,  

ZOU Ling-ling ,  

XU Mao-ting ,  

ZHANG Lu ,  

CHEN Gui-quan ,  

摘要

目的は電気鍼が足少陽経穴を介してホスファチジルイノシトール3キナーゼ(PI3K)/プロテインキナーゼB(AKT)シグナル経路を調節し、閉経後骨粗鬆症ラットの炎症反応に及ぼす影響を検討することである。方法:40匹のSDラットを無作為に選び、10匹を偽手術群とし、残りは両側卵巣摘出後3か月で閉経後骨粗鬆症モデルを作成し、モデル群、電気鍼群、電気鍼+阻害剤群にそれぞれ10匹ずつ無作為に分けた。電気鍼群は両側の「環跳」「陽陵泉」に電気鍼(疎密波、周波数2 Hz/15 Hz、強度0.2~0.6 mA)を行い、「懸鐘」に刺鍼、各回10分間、週5回、計8週間、左右交互に刺鍼した。電気鍼+阻害剤群は電気鍼群の治療に加え、腹腔内にPI3K阻害剤LY294002(10 mg/kg)を週2回、計8週間投与した。Micro-CTでラットの大腿骨組織の微細構造と計量指標を検出し、骨密度(BMD)、骨体積率(BV/TV)、骨梁数(Tb.N)、骨梁間隔(Tb.Sp)を含む。HE染色で大腿骨の病理形態を観察し、抗酒石酸酸性ホスファターゼ(TRAP)染色で破骨細胞数を観察した。免疫組織化学染色で骨組織の骨形成マーカーであるRunt関連転写因子2(Runx2)、骨カルシトニン(OCN)、Ⅰ型コラーゲン(Collagen I)の発現を検出した。ELISA法およびリアルタイム蛍光定量PCR法で血清および骨組織中のインターロイキン-1β(IL-1β)、インターロイキン-6(IL-6)、腫瘍壊死因子-α(TNF-α)の含量およびmRNA発現を測定した。Western blot法で大腿骨組織のPI3K/AKT経路タンパク質発現を検出した。結果:モデル群では骨梁が著しく細くなり、配列が希薄で乱れ、骨髄腔が拡大し、破骨細胞数が明らかに増加した。電気鍼群では骨梁の構造と形態が改善され、破骨細胞数が減少した。偽手術群と比較して、モデル群ではBMD、BV/TV、Tb.N、骨組織中のRunx2、OCN、Collagen I陽性発現、p-PI3K/PI3Kおよびp-AKT/AKTタンパク発現比率が有意に低下し(P <0.01)、Tb.Sp、血清および骨組織中のIL-6、IL-1β、TNF-α含量およびmRNA発現は有意に増加した(P <0.01)。モデル群と比較して、電気鍼群ではBMD、BV/TV、Tb.N、骨組織中のRunx2、OCN、Collagen I陽性発現、p-PI3K/PI3Kおよびp-AKT/AKTタンパク発現比率が有意に上昇し(P <0.01、P <0.05)、Tb.Sp、血清および骨組織中のIL-6、IL-1β、TNF-α含量およびmRNA発現は有意に低下した(P <0.01)。電気鍼群と比較して、電気鍼+阻害剤群ではTb.Spを除く上述の指標が逆転した(P <0.01、P <0.05)。結論:電気鍼は足少陽経穴により閉経後骨粗鬆症ラットの炎症反応および骨量減少を軽減でき、その作用機序はPI3K/AKT経路の活性化と関係がある可能性がある。

关键词

電気鍼; 足少陽経穴; ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ/プロテインキナーゼB経路; 骨粗鬆症; 炎症反応

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