目的は、針刺が虚血性脳卒中モデルラットの超時間ウィンドウ血栓溶解の安全性効果を向上させることを明らかにし、受容体相互作用タンパク質キナーゼ1（RIPK1）/受容体相互作用タンパク質キナーゼ3（RIPK3）/基質混合系キナーゼ様タンパク質（MLKL）シグナル経路を抑制することにより媒介されるプログラム性細胞壊死を介して血栓溶解の安全性を向上させるメカニズムを解明することである。方法は、33匹のSDラットをシャム手術群として無作為に選定し、モデル成功ラット99匹を無作為数字表法でモデル群、6時間血栓溶解群、針刺＋6時間血栓溶解群に分け、各群33匹とした。シャム手術群を除き、他の群は自己血栓塞栓法によって虚血性脳卒中モデルを作製した。6時間血栓溶解群は、モデル作製成功後6時間に組換え組織型プラスミノーゲンアクチベーターを用いた静脈血栓溶解治療を行い、針刺＋6時間血栓溶解群は6時間血栓溶解と同時に両側の「内関」「水溝」穴位に針刺を加え、20分間留針した。Bedersonスコアでラットの神経機能を評価し、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウム塩染色法で脳梗塞体積を観察し、エバンスブルー浸透法で血液脳関門（BBB）透過性を検出し、体積比重法で脳水分含量を測定し、分光光度法で虚血部脳組織のヘモグロビン濃度を検出し、Western blot法で虚血半暗帯領域のRIPK1、RIPK3、リン酸化（p）-MLKLタンパク質発現を検出し、リアルタイム蛍光定量PCR法でRIPK1、RIPK3、MLKL mRNA発現を検出し、二重免疫蛍光染色法でp-MLKLと内皮細胞の共局在を検出した。結果はモデル作製後ラットの血流量が著明に低下し、モデル作製成功後2時間に神経行動学スコアが上昇した（P<0.01）。24時間後、シャム手術群と比較しモデル群は神経行動学スコア、脳梗塞体積割合、BBB透過性が増加し（P<0.01）、虚血半暗帯部のRIPK1タンパク質発現レベルが上昇し（P<0.05）、RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA発現レベルが増加した（P<0.01、P<0.05）；虚血半暗帯部のp-MLKLと内皮細胞共局在陽性細胞割合が増加した（P<0.01）。モデル群と比較し6時間血栓溶解群はBBB透過性、脳水分含量および脳ヘモグロビン濃度がさらに増加し（P<0.01、P<0.05）、虚血半暗帯部のRIPK3、p-MLKLタンパク質発現レベルが上昇し（P<0.05）、RIPK3、MLKL mRNA発現レベルが増加し（P<0.05）、虚血半暗帯部のp-MLKLと内皮細胞共局在陽性細胞割合が増加した（P<0.01）。モデル群と比較し針刺＋6時間血栓溶解群は神経行動学スコア、脳梗塞体積割合、BBB透過性および脳水分含量が減少し（P<0.01、P<0.05）、虚血半暗帯部のRIPK1タンパク質およびmRNA発現レベルが減少し（P<0.05）、虚血半暗帯部のp-MLKLと内皮細胞共局在陽性細胞割合が減少した（P<0.05）。6時間血栓溶解群と比較し針刺＋6時間血栓溶解群は神経行動学スコア、梗塞体積割合、BBB透過性、脳水分含量および脳ヘモグロビン濃度が減少し（P<0.01）、虚血半暗帯部のRIPK1、RIPK3およびp-MLKLタンパク質発現レベルが減少し（P<0.05、P<0.01）、RIPK1およびRIPK3、MLKL mRNA発現レベルが減少し（P<0.01、P<0.05）、虚血半暗帯部のp-MLKLと内皮細胞共局在陽性細胞割合が減少した（P<0.01）。結論：針刺の適時介入は虚血性脳卒中ラットの血栓溶解後の神経機能を改善し、脳梗塞体積を縮小し、BBB透過性を低下させ、血栓溶解合併症の発生を減少させて血栓溶解の安全性を向上させることが示唆され、その機序は針刺がRIPK1/RIPK3/MLKLシグナル経路を抑制し、内皮細胞のプログラム性細胞壊死を抑えることに関連すると考えられる。

針刺;虚血性脳卒中;プログラム性細胞壊死;血栓溶解安全性