延髄頭端腹外側領域TH陽性ニューロンは電気鍼による機能性便秘マウスの腸運動障害改善を媒介する

Wang Dan ,  

He Zhaoxuan ,  

Yu Mingkai ,  

Wu Ruohan ,  

Deng Xiao ,  

Luo Yucai ,  

Li Yifan ,  

Lai Peng ,  

Yao Xiaoheng ,  

Yin Tao ,  

Zeng Fang ,  

摘要

目的は、延髄頭端腹外側領域(RVLM)におけるチロシンヒドロキシラーゼ(TH)陽性ニューロンが、電気鍼による機能性便秘(FC)マウスの腸運動障害改善に果たす役割を検討することである。方法:まず、逆行性経シナプスウイルスを用いて近位結腸を支配する射出脳領域を同定した。次に、18匹のC57BL/6Jマウスを正常群、モデル群、電気鍼群の3群に無作為に分け、それぞれ6匹ずつとした。ロペラミド塩酸塩の経口投与によりFCモデルを構築した。電気鍼群には「天枢」「上巨虚」への電気鍼を5日間/療程、計2療程実施した。各群の排便状況を観察し、便の含水率を測定した。初回の黒色便排出時間を記録し、小腸推進率を測定した。ELISA法により血清および結腸中のTH含量を測定し、免疫蛍光法でRVLMにおけるTH/c-Fosの共発現を検出した。続いて、12匹のC57BL/6Jマウスを空ベクター+CNO群および抑制ウイルス+CNO群に無作為に分け、さらに18匹を空ベクター+CNO群、電気鍼群、活性化ウイルス+CNO+電気鍼群に無作為に分け、各群6匹ずつとした。RVLM脳領域にそれぞれのウイルスを注入し、ウイルス発現21日後に腹腔内CNO(1mg/kg)を注射した。電気鍼群および活性化ウイルス+CNO+電気鍼群はCNO注射後30分で電気鍼介入を行い、方法は同様とした。これら各群について排便観察および腸運動検査を同様に行った。最後に、別の18匹のC57BL/6JマウスにRVLM脳領域へrAAV-hSyn-GCaMP6sウイルスを注入し、ウイルス感染21日後に空群、モデル対照群、モデル+電気鍼群に無作為に分け、各群6匹ずつとした。多チャネル光ファイバー記録システムによりRVLM脳領域の神経細胞のカルシウム信号変化を記録した。結果:逆行性経シナプスウイルストレーシング実験により、RVLMニューロンと近位結腸との神経線維シナプス連結が存在することが示された。正常群と比較し、モデル群マウスは初回の黒色便排出時間が延長し、便の総数が減少し、含水率および小腸推進率が低下した(P<0.001、P<0.01)。血清および結腸中のTH含量は増加し(P<0.01)、RVLMにおけるTH陽性およびc-Fos陽性ニューロン数、TH/c-Fos共発現ニューロン数は増加した(P<0.001)。モデル群と比較し、電気鍼群は初回の黒色便排出時間が短縮し、便の総数が増加し、含水率および小腸推進率が増加した(P<0.001、P<0.01)。血清および結腸中のTH含量は減少し(P<0.01)、RVLMにおけるTH陽性、c-Fos陽性およびTH/c-Fos共発現ニューロン数は減少した(P<0.001)。空ベクター+CNO群と比較し、抑制ウイルス+CNO群マウスは初回の黒色便排出時間が短縮し、便数が増加し、含水率および小腸推進率が増加した(P<0.001、P<0.01)。空ベクター+CNO群と比較して電気鍼群マウスも同様に初回の黒色便排出時間短縮、便数増加、含水率および小腸推進率増加を示した(P<0.001、P<0.01)。電気鍼群と比較し、活性化ウイルス+CNO+電気鍼群マウスは初回の黒色便排出時間が延長し、便数が減少し、含水率および小腸推進率が低下した(P<0.001、P<0.01)。空群と比較し、モデル対照群マウスのRVLM脳領域のCa2+信号活動は有意に増加した(P<0.001)。モデル対照群と比較し、モデル+電気鍼群マウスのRVLM脳領域Ca2+信号活動は有意に減少した(P<0.001)。結論:大腸募穴および下合穴「天枢」「上巨虚」への電気鍼は、RVLM脳領域のTH陽性ニューロン活性を抑制することでFCマウスの腸運動障害を改善する可能性がある。

关键词

電気鍼; 延髄頭端腹外側領域; チロシンヒドロキシラーゼ陽性神経; 腸運動障害

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