전침이 만성 폐쇄성 폐질환 쥐 폐 조직 Nur77, TRAF2 단백질 발현 및 대식세포 자가포식에 미치는 영향
ZHANG Zhen
,
FANG Danqun
,
YIN Xiuwen
,
LIU Na
,
ZHANG Xinfang
,
XIANG Shuiying
,
LIU Zibing
,
DOI:
摘要
목적은 전침이 핵 수용체 77(Nur77)의 발현 및 이를 통한 핵-세포질 이동을 조절하여 종양 괴사 인자 수용체 관련 인자 2(TRAF2)와 Nur77 간 상호작용에 영향을 미치고, 폐 조직 대식세포의 과도한 자가포식을 억제하여 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 쥐의 폐 염증 반응을 개선하는지 관찰하는 것이다. 방법은 SPF 등급 C57BL/6 수컷 쥐 40마리를 무작위로 10마리를 대조군으로 선정하고 나머지 30마리는 3개월간 담배 연기에 노출시켜 COPD 쥐 모델을 제작하였다. 동물 모델이 성공적으로 구축된 후 실험 쥐들은 무작위로 모델군, 전침군 및 길항제+전침군의 세 그룹으로 나누었으며 각 그룹당 10마리씩 배정하였다. 전침군과 길항제+전침군 쥐에게는 좌우 “폐수” 와“족삼리”에 전침을 매일 1회 20분간 총 14일간 시술하였다; 길항제+전침군 쥐는 매일 전침 30분 전 복강 내 Nur77 길항제 DIM-C-pPhOH(25 mg/kg)를 1회 투여하였다. 동물 호흡 기능 분석기로 쥐 폐 기능을 측정하였고, HE 염색으로 폐 조직 병리 형태 변화를 관찰하였다; 기관지폐포 세척액(BALF) 내 세포 인자 IL-6, IL-1β, TNF-α 함량을 ELISA로 검출하였고; 분광법으로 폐 조직 초과산화물 불균등화효소(SOD) 활성과 말론디알데하이드(MDA) 함량을 측정하였다; Western blot으로 폐 조직 내 Nur77(핵 단백 및 세포질 단백), TRAF2, 미세관 관련 단백질 1 경쇄 3(LC3), 자가포식 연계 단백질 P62(P62) 발현을 검출하였다; 실시간 형광 정량 PCR로 폐 조직 내 Nur77, Traf2 mRNA 발현 수준을 측정하였다; 면역공침전법(Co-IP)으로 Nur77과 TRAF2의 상호작용을 확인하였다; 투과전자현미경으로 폐 조직 내 대식세포의 자가포식소 변화를 관찰하였다. 결과는 대조군과 비교 시 모델군 쥐의 호흡 기능 지표가 유의하게 감소하였으며(P<0.05, P<0.01), 병리 조직 검사상 폐포벽 구조가 두꺼워지고 여러 폐포가 융합되어 큰 낭포양 구조를 형성하며 다량의 염증 세포가 확산 침윤되었고, 기관지폐포 세척액 검사에서 전염증 인자인 IL-6, IL-1β, TNF-α가 유의하게 증가하였으며 폐 조직 내 SOD 활성은 현저히 감소하고 MDA 함량은 현저히 증가하였다(P<0.01); 폐 조직 내 LC3II/LC3I 비율은 유의하게 상승하였으며(P<0.05) P62 단백질 발현은 현저히 감소하였다(P<0.01), TRAF2 단백질 수준은 유의하게 상승하였고(P<0.01), 핵 내 Nur77 발현량은 뚜렷이 증가한 반면 세포질 내 발현량은 유의하게 감소하였다(P<0.01). 또한 Nur77 유전자 전사 수준은 유의하게 감소하였고(P<0.01) Traf2 유전자 전사 수준은 뚜렷이 상승하였으며(P<0.05) Nur77과 TRAF2의 상대 결합량은 유의하게 감소하였다(P<0.01). 전침군은 모델군에 비해 위 지표들이 여러 정도로 개선되었으며(P<0.05, P<0.01), SOD 활성은 유의하게 증가하고(P<0.01), MDA 함량은 유의하게 감소하였고(P<0.05); LC3II/LC3I 비율은 유의하게 감소하고(P<0.01) P62 단백질 발현은 유의하게 증가하였으며(P<0.01), TRAF2 단백질 수준은 유의하게 감소하였고(P<0.05), 핵 내 Nur77 발현량은 현저히 감소한 반면 세포질 내 발현량은 유의하게 증가하였다(P<0.05, P<0.01), Nur77 mRNA 발현은 상향 조절되었고 Traf2 mRNA 발현은 유의하게 감소하였다(P<0.05); Nur77과 TRAF2의 상대 결합량은 유의하게 증가하였고(P<0.05), 대식세포 내 자가포식소 수는 뚜렷이 감소하였다. 길항제+전침군은 전침군에 비해 위 지표들이 모두 역전되었다(P<0.05,P<0.01). 결론 전침은 Nur77 발현을 상향 조절하고 핵에서 세포질로 이동하도록 촉진하여 Nur77과 TRAF2의 상호작용을 강화하고 자가포식 관련 단백질을 조절함으로써 폐 대식세포의 과도한 자가포식을 억제하고 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 폐부 염증 반응을 완화할 수 있다.