침술이 cAMP 신호 경로를 조절하여 수면 박탈 생쥐의 난소 기능 저하를 개선하는 기전

GAN Di ,  

LIU Li-ying ,  

HAO Jian-heng ,  

CHANG Bo-ya ,  

WANG Hai-jun ,  

YANG Jie ,  

摘要

목적은 전사체학을 기반으로 침술이 고리형 AMP(cAMP) 신호 경로 조절을 통해 수면 박탈(SD)로 유도된 생쥐 난소 기능 저하를 개선하는 잠재 기전을 탐구하는 것이다. 방법: 발정 주기가 규칙적인 C57BL/6 암컷 생쥐를 대조군, SD군 및 침술군으로 무작위 분류하였으며 각 군별 15마리씩 배치하였다. 대조군은 6주 동안 정상적인 생활 패턴을 유지하였고, SD군과 침술군은 매일 16:00부터 다음 날 12:00까지 20시간 동안 6주 연속 수면 박탈을 실시하였다. 침술군은 4주차부터 비SD 시간대에 “백회”, “삼음교”, “관원”에 침술 치료를 주 6일, 매회 20분씩 3주간 연속 시행하였다. 질 탈락 세포 도말법으로 생쥐의 발정 주기 변화를 관찰하였으며, 체중, 난소 습중량을 측정하고 난소 지수를 계산하였다. 헤마톡실린-에오신 염색법으로 난소 조직 형태를 관찰하였고, ELISA법으로 혈청 내 난포 자극 호르몬(FSH), 황체 형성 호르몬(LH), 항뮐러관 호르몬(AMH), 에스트라디올(E2) 함량과 난소 조직 내 cAMP 함량을 측정하였다. 전사체학 기술을 이용해 각 군 난소 조직 차등 발현 유전자(DEG)를 검출하고 기능 분석을 수행하였다. 실시간 형광 정량 PCR 및 웨스턴 블롯법으로 난소 조직 내 난포 자극 호르몬 수용체(FSHR), 고리형 AMP 반응 요소 결합 단백질 1(CREB1), 단백질 키나제 A 촉매 소단위 α(PRKACA), 아데닐산 사이클레이스 5(ADCY5)의 mRNA 및 단백질 발현 변화를 각각 검출하였다. 결과: 치료 후 대조군과 비교해 SD군에서는 발정 주기 장애율이 증가했고(P < 0.01), 체중, 난소 습중량, 난소 지수가 감소하였으며(P < 0.01), 난소 조직 형태 구조가 파괴되고 폐쇄 난포가 증가하였다. 혈청 내 FSH와 LH 함량은 상승했으나(P < 0.01), AMH와 E2 함량은 감소하였다(P < 0.01). SD군과 비교해 침술군에서는 발정 주기 장애율이 감소하였고(P < 0.01), 체중, 난소 습중량, 난소 지수가 증가하였으며(P < 0.01), 난소 조직 병리 구조가 개선되고 폐쇄 난포가 감소하였다. 혈청 중 FSH와 LH 함량이 감소했으며(P < 0.01), AMH와 E2 함량은 증가하였다(P < 0.01). 전사체학 분석에서 역상관 조절 경향이 있는 173개의 교집합 DEG를 확인하였으며, 유전자 기능 분석에서 이들 DEG는 주로 다른 유기체 반응 등 생물학적 과정에 참여하고 주로 세포외 영역 등 세포 구성 요소에 존재하며 2’-5’ 올리고아데닐산 합성효소 활성 등 분자 기능과 관련이 있음을 나타냈다. 유전체 백과사전 풍부화 분석에서 이들 DEG는 주로 cAMP 신호 경로에 관여하였으며, 유전자 집합체 풍부화 분석에서 SD군에서는 cAMP 신호 경로가 억제된 반면 침술군에서는 활성화 경향을 보였다. 대조군과 비교 시 SD군에서는 난소 내 cAMP 함량, FSHR, CREB1, ADCY5, PRKACA mRNA 발현, FSHR, ADCY5, PRKACA 단백질 발현 및 인산화(p)-CREB1/CREB1 단백질 발현 비율이 모두 유의하게 감소하였다(P < 0.01). SD군과 비교 시 침술군에서는 난소 내 cAMP 함량, FSHR, CREB1, ADCY5, PRKACA mRNA 발현 수준, FSHR, ADCY5, PRKACA 단백질 발현 수준 및 p-CREB1/CREB1 단백질 발현 비율이 모두 유의하게 증가하였다(P < 0.01, P < 0.05). 결론: 침술은 SD로 유도된 생쥐 난소 기능 저하를 개선할 수 있으며, 그 기전은 cAMP 신호 경로의 CREB1, FSHR, ADCY5 및 PRKACA와 같은 주요 분자의 발현 조절과 관련이 있을 수 있다.

关键词

침술; 수면 박탈; 난소 기능 저하; 전사체학; 차등 발현 유전자; 고리형 AMP 신호 경로

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