목적은 "뇌를 깨우고 기운을 열어주는" 침술법이 중간대뇌동맥 폐색/재관류(MCAO/R) 랫드 대뇌피질 허혈 반음영(IP) 영역의 고리형 사이클릭 아데노신 일인산 조절 구아닌 뉴클레오타이드 교환인자 1(Epac1)/ 랫드 육종 단백질 관련 단백질 1(Rap1) 신호 경로에 미치는 영향을 관찰하고, 이 침술법이 혈뇌장벽(BBB)을 복구하여 뇌허혈 재관류 손상(CIRI)을 경감하는 분자 경로를 탐색하는 것이다. 방법으로 84마리의 수컷 SD 랫드를 가짜 수술군, 모델군, 침술군, 침술+ESI-09(Epac1 억제제)군으로 무작위 배정했으며 각 군에는 21마리가 포함되었다. 가짜 수술군을 제외한 나머지 군에서는 수정된 Longa 선차단법으로 우측 MCAO/R 모델을 구축했다. 침술군은 "수구" 및 양측 "내관"에서 "뇌를 깨우고 기운을 열어주는" 침술법을 시행했으며, 침술+ESI-09군은 재관류 후 복강 내 ESI-09(10 mg/kg)를 주입하고 같은 방법으로 침술을 했다. 레이저 스펙클 혈류 영상기기를 사용하여 뇌혈류를 모니터링했다(허혈 전, 허혈 2시간, 허혈 2시간 후 재관류); 수정된 Bederson 점수로 신경학적 기능 결손을 평가했다(재관류 24시간 후); 트리페닐테트라졸리움염색법(TTC)으로 뇌경색 부피 백분율을 측정했다; 습건 중량법으로 우측 뇌 수분 함량을 측정했다; Evans Blue(EB) 염색법으로 우측 대뇌 피질 BBB 투과성을 평가했다; 웨스턴 블롯 및 실시간 형광 정량 PCR법으로 우측 대뇌 피질 IP 영역의 Epac1, Rap1 단백질 및 mRNA 발현을 검출했다; 면역형광염색법으로 우측 대뇌 피질 IP 영역의 F-액틴(F-actin)과 혈소판 내피세포 부착 분자(CD31, 내피세포 표지자) 형광 공위치 영역 비율을 검출했다; 투과전자현미경으로 우측 대뇌 피질 IP 영역 BBB 초미세구조를 관찰했다. 결과는 가짜 수술군을 제외한 모든 군에서 허혈 후 뇌혈류량이 기저선의 70% 이하로 떨어졌다가 2시간 재관류 후 기저선의 70% 이상으로 회복되어 모델이 성공했음을 보여주었다. 24시간 재관류 후, 가짜 수술군과 비교 시 모델군은 신경기능 점수, 경색 부피 백분율, 뇌 수분 함량 및 EB 함량이 모두 증가했고(P<0.01), 우측 대뇌 피질 IP 영역의 Epac1, Rap1 단백질 및 mRNA 발현은 감소했으며(P<0.05, P<0.01), F-actin과 CD31 공위치 영역 비율은 증가(P<0.01), BBB 기저막은 흐릿하고 단절되었으며 밀착접합부(TJ)는 부분적으로 용해 또는 결손되었다. 모델군과 비교했을 때, 침술군 쥐는 상기 손상 지표가 모두 개선되었고(P<0.01), 우측 대뇌 피질 IP 영역 Epac1, Rap1 단백질 및 mRNA 발현은 증가(P<0.01), F-actin과 CD31 공위치 영역 비율은 감소(P<0.01), BBB 기저막은 연속적이고 TJ 구조는 치밀했다. 침술군과 비교하여 침술+ESI-09군은 손상 지표가 되돌아갔으며(P<0.01), 우측 대뇌 피질 IP 영역 Epac1, Rap1 단백질 및 mRNA 발현은 감소(P<0.01), F-actin과 CD31 형광 공위치 영역 비율은 증가(P<0.01), BBB 기저막은 여전히 흐릿하고 TJ 부위가 용해되었다. 결론적으로 "뇌를 깨우고 기운을 열어주는" 침술법은 대뇌 피질 IP 영역의 Epac1/Rap1 경로를 조절하여 내피세포 골격 재배치를 유도하고 CIRI 후 BBB 손상을 완화한다.

침술;Epac1/Rap1 신호 경로;혈뇌장벽;뇌허혈 재관류 손상;내피세포 골격 재배치