Efeitos da electroacupuntura na expressão das proteínas Nur77, TRAF2 e na autofagia de macrófagos no tecido pulmonar de camundongos com doença pulmonar obstrutiva crônica
ZHANG Zhen
,
FANG Danqun
,
YIN Xiuwen
,
LIU Na
,
ZHANG Xinfang
,
XIANG Shuiying
,
LIU Zibing
,
DOI:
摘要
Objetivo: observar se a electroacupuntura pode, através da regulação da expressão do receptor nuclear 77 (Nur77) e sua translocação núcleo-citoplasmática, afetar a interação entre Nur77 e o fator associado ao receptor do fator de necrose tumoral 2 (TRAF2), inibindo assim a autofagia excessiva dos macrófagos no tecido pulmonar e melhorando a resposta inflamatória pulmonar em camundongos com doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). Métodos: foram utilizados 40 camundongos machos C57BL/6 de grau SPF; 10 foram selecionados aleatoriamente como grupo controle em branco, e os 30 restantes foram expostos à fumaça de cigarro por 3 meses para reproduzir o modelo de DPOC em camundongos. Após o estabelecimento bem-sucedido do modelo animal, os camundongos experimentais foram divididos aleatoriamente em três grupos: grupo modelo, grupo electroacupuntura e grupo antagonista + electroacupuntura, com 10 camundongos em cada grupo. Os grupos electroacupuntura e antagonista + electroacupuntura receberam intervenção com electroacupuntura bilateral nos pontos “Feishu” e “Zusanli”, uma vez ao dia, 20 min por sessão, por um total de 14 dias; o grupo antagonista + electroacupuntura recebeu injeções intraperitoneais do antagonista Nur77 DIM-C-pPhOH (25 mg/kg) 30 min antes de cada sessão diária de electroacupuntura, durante 14 dias. A função pulmonar dos camundongos foi avaliada usando um analisador de função respiratória animal; a coloração HE foi utilizada para observar as mudanças morfológicas patológicas no tecido pulmonar; os níveis das citocinas IL-6, IL-1β e TNF-α no fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) foram medidos por ELISA; a atividade da superóxido dismutase (SOD) e o conteúdo de malondialdeído (MDA) no tecido pulmonar foram detectados por método colorimétrico; a expressão de Nur77 (proteínas nuclear e citoplasmática), TRAF2, LC3 e da proteína de ancoragem da autofagia P62 (P62) foram detectadas por Western blot; os níveis de expressão do mRNA de Nur77 e Traf2 no tecido pulmonar foram determinados por PCR quantitativo em tempo real; a interação entre Nur77 e TRAF2 foi investigada por co-imunoprecipitação (Co-IP); e as alterações nos autofagossomos dentro dos macrófagos pulmonares foram observadas por microscopia eletrônica de transmissão. Resultados: em comparação com o grupo em branco, o grupo modelo apresentou uma tendência significativa de diminuição nos parâmetros da função respiratória (P<0.05, P<0.01); os cortes patológicos mostraram espessamento da parede alveolar, fusão de múltiplos alvéolos formando estruturas vesiculares maiores, acompanhados de infiltração difusa maciça de células inflamatórias. A análise do BALF revelou aumento significativo dos fatores pró-inflamatórios IL-6, IL-1β e TNF-α; a atividade da SOD pulmonar reduziu significativamente e o conteúdo de MDA aumentou significativamente (P<0.01); a razão LC3II/LC3I aumentou significativamente (P<0.05), a expressão da proteína P62 diminuiu significativamente (P<0.01), o nível da proteína TRAF2 aumentou significativamente (P<0.01), enquanto a expressão nuclear de Nur77 aumentou e a expressão citoplasmática diminuiu significativamente (P<0.01). Além disso, a transcrição gênica de Nur77 diminuiu significativamente (P<0.01), enquanto a transcrição gênica de Traf2 aumentou significativamente (P<0.05); a ligação relativa entre Nur77 e TRAF2 diminuiu significativamente (P<0.01). A microscopia eletrônica revelou um aumento significativo no número de autofagossomos dentro dos macrófagos. Comparado com o grupo modelo, o grupo electroacupuntura apresentou melhorias variadas nos indicadores mencionados (P<0.05, P<0.01); a atividade da SOD aumentou significativamente (P<0.01), e o conteúdo de MDA diminuiu significativamente (P<0.05); a razão LC3II/LC3I diminuiu significativamente (P<0.01), a expressão da proteína P62 aumentou significativamente (P<0.01), o nível da proteína TRAF2 diminuiu significativamente (P<0.05); a expressão nuclear de Nur77 diminuiu visivelmente, enquanto a expressão citoplasmática aumentou significativamente (P<0.05, P<0.01); a expressão do mRNA de Nur77 aumentou, e a expressão do mRNA de Traf2 diminuiu significativamente (P<0.05); a ligação relativa entre Nur77 e TRAF2 aumentou significativamente (P<0.05); o número de autofagossomos nos macrófagos diminuiu visivelmente. Comparado com o grupo electroacupuntura, o grupo antagonista + electroacupuntura apresentou reversão desses indicadores (P<0.05,P<0.01). Conclusão: a electroacupuntura pode aumentar a expressão de Nur77 e promover sua translocação do núcleo para o citoplasma, reforçar a interação entre Nur77 e TRAF2, regular proteínas relacionadas à autofagia, inibir a autofagia excessiva dos macrófagos pulmonares e aliviar a resposta inflamatória pulmonar na DPOC.
关键词
electroacupuntura; doença pulmonar obstrutiva crônica; receptor nuclear 77; fator associado ao receptor do fator de necrose tumoral 2; autofagia de macrófagos