Estudo do mecanismo pelo qual a eletroacupuntura regula a via de sinalização IL-4/JAK1/STAT6 para promover a polarização dos macrófagos M2 e melhorar o dano da barreira mucosa intestinal em camundongos com colite ulcerativa

HU Xiao-mei ,  

ZHANG Hong ,  

TANG Ya-si ,  

PAN Yan-ying ,  

ZHUO Yue ,  

DENG Shi-feng ,  

YI Xi-qin ,  

摘要

O objetivo foi observar o efeito da intervenção com eletroacupuntura na via de sinalização da interleucina-4 (IL-4) / tirosina quinase 1 (JAK1) / fator de transdução de sinal e ativação da transcrição 6 (STAT6) no tecido do cólon em camundongos modelo de colite ulcerativa crônica (UC), e explorar o possível mecanismo pelo qual a eletroacupuntura promove a polarização dos macrófagos do tipo M2, melhorando o dano na barreira mucosa intestinal em camundongos modelo de UC. Camundongos BALB/c nível SPF com 8 semanas de idade, metade fêmeas e metade machos, foram estratificados por sexo e aleatoriamente divididos em grupo controle (15 camundongos) e grupo modelo (41 camundongos). O modelo de UC crônica foi induzido pela ingestão de solução de sulfato de dextrano a 3%. Os camundongos com sucesso no modelo foram divididos aleatoriamente em grupo modelo, grupo eletroacupuntura + 11B11, grupo eletroacupuntura. No final, cada grupo incluiu 12 camundongos. O grupo eletroacupuntura + 11B11 recebeu injeção intraperitoneal do inibidor de IL-4 11B11 (10 mg/kg) antes da eletroacupuntura; a eletroacupuntura foi aplicada nos pontos “Guanyuan”, “Tianshu”, “Zusanli” e “Shangjuxu” durante 20 minutos por vez; cada grupo recebeu intervenção diária por 14 dias consecutivos. Após a intervenção foram avaliados: ① Melhora dos sintomas: incluindo a pontuação do índice de atividade da doença (DAI), avaliação macroscópica do cólon e observação das alterações patológicas no tecido do cólon corado por HE; ② Estrutura e função da barreira mucosa intestinal: observação da estrutura das junções apertadas do cólon por microscopia eletrônica de transmissão, imagem in vivo com isotiocianato de fluoresceína-4D (FITC-4D) para detectar vazamento intestinal, coloração imunofluorescente para detectar expressão positiva das proteínas ZO-1 e ocludina no tecido do cólon; ③ Ativação da via de sinalização IL-4/JAK1/STAT6: expressão relativa das proteínas IL-4, p-JAK1/JAK1 e p-STAT6/STAT6 no tecido do cólon detectada por Western blot; ④ Marcadores relacionados à polarização de macrófagos M2: citometria de fluxo para detectar a proporção CD206+/CD86+ nos linfonodos mesentéricos, coloração imunofluorescente para detectar a expressão positiva de CD206 e arginase-1 (Arg-1) no tecido do cólon. Em comparação com o grupo controle, o grupo modelo apresentou aumento significativo nas pontuações DAI e macroscópicas (P<0,05), desorganização da estrutura da mucosa do cólon e vazamento fluorescente intestinal grave, expressão positiva significativamente reduzida de ZO-1 e ocludina (P<0,05), diminuição na expressão proteica relativa de IL-4, p-JAK1/JAK1 e p-STAT6/STAT6 (P<0,05), diminuição na proporção CD206+/CD86+ e expressão positiva de CD206 e Arg-1 (P<0,05). Em comparação com o grupo modelo, o grupo eletroacupuntura apresentou redução nas pontuações DAI e macroscópicas (P<0,05), melhora na estrutura da mucosa do cólon, redução no vazamento fluorescente intestinal, aumento significativo na expressão positiva de ZO-1 e ocludina (P<0,05), aumento na expressão proteica relativa de IL-4, p-JAK1/JAK1 e p-STAT6/STAT6 (P<0,05), aumento na proporção CD206+/CD86+ e expressão positiva de CD206 e Arg-1 (P<0,05). Em comparação com o grupo eletroacupuntura, o grupo eletroacupuntura + 11B11 apresentou redução nas pontuações DAI e macroscópicas (P<0,05), desorganização da estrutura da mucosa do cólon, vazamento fluorescente intestinal evidente, expressão positiva significativamente reduzida de ZO-1 e ocludina (P<0,05), diminuição da expressão proteica relativa de IL-4, p-JAK1/JAK1 e p-STAT6/STAT6 (P<0,05), diminuição na proporção CD206+/CD86+ e expressão positiva de CD206 e Arg-1 (P<0,05). Conclusão: A eletroacupuntura pode promover a reparação da barreira mucosa do cólon em camundongos com UC crônica, melhorar sintomas como diarreia e sangramento retal, e seu mecanismo está relacionado à ativação da via de sinalização IL-4/JAK1/STAT6 no tecido do cólon e à indução da polarização dos macrófagos M2.

关键词

eletroacupuntura; colite ulcerativa; barreira mucosa intestinal; macrófagos M2; via de sinalização interleucina-4/tirosina quinase-1/fator de transdução de sinal e ativação da transcrição 6

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