Estudo do mecanismo pelo qual a eletroacupuntura regula a via IL-4/JAK1/STAT6 para promover a polarização de macrófagos M2 e melhorar o dano da barreira da mucosa intestinal em camundongos com colite ulcerativa
Objetivo observar o efeito da intervenção com eletroacupuntura na via de sinalização da interleucina-4 (IL-4) / quinase de tirosina 1 (JAK1) / fator de transdução e ativação de sinal 6 (STAT6) nos tecidos do cólon de camundongos modelo de colite ulcerativa crônica (UC), explorar o possível mecanismo pelo qual a eletroacupuntura promove a polarização dos macrófagos do tipo M2, melhorando o dano da barreira da mucosa intestinal em camundongos modelo de UC. Foram usados camundongos BALB/c com 8 semanas de idade, nível SPF, metade machos e metade fêmeas, estratificados por sexo e divididos aleatoriamente em grupo controle (15 camundongos) e grupo modelo (41 camundongos) segundo tabela de números aleatórios. O modelo crônico de UC foi induzido pela ingestão de solução a 3% de sulfato de dextrano sódico, e os camundongos com modelo bem-sucedido foram divididos aleatoriamente em grupo modelo, grupo eletroacupuntura+11B11 e grupo eletroacupuntura. Por fim, cada grupo incluiu 12 camundongos. O grupo eletroacupuntura+11B11 recebeu injeção intraperitoneal do inibidor de IL-4 11B11 (10 mg/kg) antes da eletroacupuntura; o grupo eletroacupuntura recebeu acupuntura nos pontos “Guanyuan”, “Tianshu”, “Zusanli” e “Shangjuxu”, 20 min por sessão; cada grupo recebeu intervenção uma vez ao dia, durante 14 dias consecutivos. Após a intervenção, foi avaliado: ① melhora dos sintomas: incluindo escore do índice de atividade da doença (DAI), escore macroscópico do cólon e observação das alterações patológicas do tecido do cólon pela coloração HE; ② estrutura e função da barreira da mucosa intestinal: observação da estrutura das junções apertadas no cólon por microscopia eletrônica de transmissão, imagem in vivo da permeabilidade intestinal por FITC-4D, detecção da expressão positiva das proteínas ZO-1 e ocludina no tecido do cólon por imunofluorescência; ③ ativação da via de sinalização IL-4/JAK1/STAT6: análise da expressão relativa das proteínas IL-4, p-JAK1/JAK1, p-STAT6/STAT6 no tecido do cólon por Western blot; ④ marcadores relacionados à polarização dos macrófagos M2: detecção da proporção CD206+/CD86+ nos linfonodos mesentéricos por citometria de fluxo, detecção da expressão positiva de CD206 e arginase-1 (Arg-1) no tecido do cólon por imunofluorescência. Em comparação com o grupo controle, o grupo modelo apresentou aumento significativo nos escores DAI e macroscópico (P<0,05), desorganização da estrutura da mucosa do cólon, perda severa da barreira fluorescente intestinal, diminuição significativa da expressão positiva de ZO-1 e ocludina (P<0,05), redução na expressão relativa das proteínas IL-4, p-JAK1/JAK1 e p-STAT6/STAT6 (P<0,05), diminuição na proporção CD206+/CD86+ e expressão positiva de CD206 e Arg-1 (P<0,05). Comparado com o grupo modelo, o grupo eletroacupuntura apresentou redução dos escores DAI e macroscópico (P<0,05), melhora da estrutura da mucosa do cólon, redução da perda fluorescente intestinal, aumento significativo da expressão positiva de ZO-1 e ocludina (P<0,05), aumento na expressão relativa das proteínas IL-4, p-JAK1/JAK1 e p-STAT6/STAT6 (P<0,05), aumento na proporção CD206+/CD86+ e expressão positiva de CD206 e Arg-1 (P<0,05). Em comparação com o grupo eletroacupuntura, o grupo eletroacupuntura+11B11 apresentou redução nos escores DAI e macroscópico (P<0,05), desorganização da estrutura da mucosa do cólon, perda intestinal fluorescente evidente, diminuição significativa da expressão positiva de ZO-1 e ocludina (P<0,05), diminuição na expressão relativa das proteínas IL-4, p-JAK1/JAK1 e p-STAT6/STAT6 (P<0,05), diminuição na proporção CD206+/CD86+ e expressão positiva de CD206 e Arg-1 (P<0,05). Conclusão: a eletroacupuntura pode promover a reparação da barreira da mucosa do cólon em camundongos com UC crônica, melhorar sintomas como diarreia e sangramento retal, e seu mecanismo está relacionado à ativação da via de sinalização IL-4/JAK1/STAT6 e à indução da polarização dos macrófagos do tipo M2 no tecido do cólon.
关键词
eletroacupuntura;colite ulcerativa;barreira da mucosa intestinal;macrófagos M2;via de sinalização interleucina-4/quinase de tirosina-1/fator de transdução e ativação de sinal 6