Estudo sobre o efeito da eletroacupuntura na autofagia hepática de camundongos obesos baseada na via AMPK/mTOR/ULK1

ZHANG Ying-rong ,  

ZHOU Zhong-yu ,  

XIA Jun-ni ,  

WANG Yi-fei ,  

ZHANG Zi-yi ,  

LIAO Lu-lu ,  

WANG Jia-jie ,  

摘要

O objetivo é investigar o efeito da eletroacupuntura na regulação da via de sinalização da proteína quinase ativada por AMP (AMPK)/alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR)/quinase ativadora da autofagia semelhante a unc-51 (ULK1) na autofagia hepática em camundongos obesos. Métodos: camundongos C57BL/6J foram aleatoriamente divididos em grupo normal, grupo modelo e grupo de eletroacupuntura, com 8 camundongos em cada grupo. O modelo de camundongos obesos foi estabelecido com dieta rica em gordura. O grupo de eletroacupuntura recebeu intervenção bilateral nos pontos “Zusanli” e “Tianshu” por 30 minutos por sessão, 5 vezes por semana, durante 4 semanas. Foram observadas alterações no índice de Lee e na massa corporal antes e depois do tratamento; a glicemia em jejum foi medida; foi realizado teste de tolerância à insulina com cálculo da área sob a curva (AUC); por ELISA, foram detectados níveis de insulina em jejum e conteúdo sérico de lipoproteínas de baixa densidade (LDL-C), lipoproteínas de alta densidade (HDL-C), colesterol total (TC) e triglicerídeos (TG), calculando-se o índice de resistência à insulina; pesou-se o tecido adiposo branco mesentérico e o tecido hepático; observou-se alterações morfológicas nos tecidos adiposos brancos mesentérico e hepático por coloração HE; observou-se o depósito lipídico no tecido hepático por coloração Oil Red O; a ultraestrutura do tecido hepático foi examinada por microscopia eletrônica de transmissão; a expressão proteica dos grupos p-AMPK/AMPK, p-mTOR/mTOR, ULK1, LC3-II, Atg5, Atg7 e SQSTM1/p62 foi detectada por Western blot; a expressão do mRNA para AMPK, mTOR, ULK1, LC3-II, Atg5, Atg7 e p62 foi avaliada por PCR quantitativo em tempo real. Resultados: em comparação com o grupo normal, o grupo modelo apresentou aumento significativo do índice de Lee, massa corporal, glicemia em jejum, insulina em jejum, índice de resistência à insulina e AUC no teste de tolerância à insulina (P < 0,01), aumento dos níveis séricos de TG, TC e LDL-C (P < 0,01), diminuição dos níveis séricos de HDL-C (P < 0,01), aumento da massa do tecido adiposo branco abdominal e hepático (P < 0,01); o diâmetro dos adipócitos no tecido adiposo branco mesentérico aumentou significativamente, enquanto o número de células por unidade de área diminuiu; os hepatócitos estavam aumentados e desorganizados, apresentando numerosas vacúolas lipídicas; depósitos lipídicos laranja foram observados em grande quantidade; as mitocôndrias estavam retraídas e o número de autofagossomos diminuiu; a expressão de mRNA e proteína de AMPK e p-AMPK/AMPK no tecido hepático diminuiu (P < 0,01), enquanto mRNA e proteína de mTOR e p-mTOR/mTOR aumentaram (P < 0,01), e a expressão de mRNA e proteína de ULK1, LC3-II, Atg5 e Atg7 diminuiu (P < 0,01), enquanto p62 mRNA e proteína aumentaram (P < 0,01). Comparado com o grupo modelo, o grupo de eletroacupuntura apresentou redução significativa do índice de Lee, massa corporal, glicemia em jejum, insulina em jejum, índice de resistência à insulina e AUC (P < 0,01), diminuição dos níveis séricos de TG, TC e LDL-C (P < 0,01), aumento dos níveis de HDL-C (P < 0,01), diminuição da massa do tecido adiposo branco abdominal e hepático (P < 0,01, P < 0,05); o diâmetro dos adipócitos diminuiu e o número de células por unidade de área aumentou; não foram observadas vacúolas lipídicas evidentes nos hepatócitos; os depósitos lipídicos laranja foram reduzidos; a estrutura mitocondrial estava normal, o número de autofagossomos aumentou, com poucos autofagossomos e autofagolisossomos visíveis; a expressão de mRNA e proteína de AMPK e p-AMPK/AMPK aumentou (P < 0,01), enquanto mRNA e proteína de mTOR e p-mTOR/mTOR diminuíram (P < 0,01), e a expressão de mRNA e proteína de ULK1, LC3-II, Atg5 e Atg7 aumentou (P < 0,01), enquanto p62 mRNA e proteína diminuíram (P < 0,01). Conclusão: a eletroacupuntura nos pontos “Zusanli” e “Tianshu” pode promover a autofagia hepática em camundongos obesos, e o mecanismo possivelmente está relacionado à regulação da via de sinalização AMPK/mTOR/ULK1.

关键词

obesidade; eletroacupuntura; via de sinalização AMPK/mTOR/ULK1; autofagia

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