Estudo do mecanismo da eletroacupuntura para melhorar a motilidade colônica em camundongos com colite ulcerativa com base no canal catiónico ativado por nucleotídeo cíclico

Li Sihui ,  

Huang Qianhui ,  

Huang Qin ,  

Wu Qiaofeng ,  

Yu Shuguang ,  

摘要

Objetivo: observar o mecanismo pelo qual a eletroacupuntura em "Shangjuxu" melhora o distúrbio da motilidade do cólon em camundongos com colite ulcerativa (UC) por meio do canal catiónico ativado por nucleotídeo cíclico 2 (HCN2). Métodos: camundongos machos C57BL/6J foram randomizados em grupo controle, grupo modelo e grupo de eletroacupuntura, com 8 camundongos em cada grupo; o modelo de UC foi estabelecido por administração oral de sulfato de dextrano. O grupo de eletroacupuntura recebeu tratamento diário de 20 minutos na acupuntura "Shangjuxu" por 7 dias consecutivos. A taxa de variação de peso corporal dos camundongos foi calculada e o índice de atividade da doença (DAI) avaliado; a coloração HE foi utilizada para observar as alterações patológicas no tecido do cólon; as alterações na motilidade do cólon foram avaliadas por técnicas eletrofisiológicas in vivo e ex vivo; comparou-se o tempo de trânsito colônico e a taxa de propulsão intestinal; a expressão de HCN2, 5-hidroxitriptamina (5-HT), triptofano hidroxilase (TPH1) e transportador de 5-HT (SERT) foi detectada por imunofluorescência; a expressão de mRNA e proteína de TPH1 e SERT foi medida por PCR quantitativo em tempo real e Western blot. Camundongos Vil1MerCreMer foram randomizados em grupo vetor e grupo induzido, com 8 camundongos cada. O gene HCN2 foi condicionalmente eliminado no epitélio intestinal desses camundongos. O grupo induzido recebeu injeções de tamoxifeno a 5 mg/mL. A técnica ELISA foi usada para medir os níveis de 5-HT e nucleotídeos cíclicos (cAMP) no soro dos camundongos Vil1MerCreMerHCN2fl/fl. As células RIN-14B foram divididas em grupo normal e grupo transfectado, no qual a expressão de HCN2 foi silenciada. A expressão de 5-HT e cAMP no sobrenadante celular foi medida por ELISA. A expressão de mRNA de HCN2 e TPH1 nas células RIN-14B foi detectada por PCR em tempo real. Resultados: em comparação com o grupo controle, o grupo modelo apresentou um estado geral pior, aumento significativo na taxa de variação do peso corporal e elevação do DAI (P<0,001), desorganização da estrutura da mucosa do cólon com edema e infiltração inflamatória evidente e aumento da pontuação patológica (P<0,001); diminuição da frequência, amplitude e área sob a curva do movimento colônico in vivo e ex vivo (P<0,001), prolongamento do tempo de trânsito do cólon e redução da taxa de propulsão intestinal (P<0,001); aumento da expressão de HCN2 no cólon (P<0,001), com co-localização com 5-HT; aumento da expressão de 5-HT, TPH1 e SERT no cólon (P<0,001). A eletroacupuntura reverteu esses efeitos (P<0,001, P<0,01, P<0,05). Após eliminação condicional de HCN2 no epitélio intestinal, os níveis séricos de 5-HT e cAMP do grupo induzido diminuíram (P<0,001). Após redução de HCN2 nas células RIN-14B, a expressão de mRNA de HCN2 e TPH1 diminuiu (P<0,001), assim como os níveis de 5-HT e cAMP no sobrenadante celular (P<0,001). Conclusão: a eletroacupuntura em "Shangjuxu" pode melhorar a motilidade intestinal em camundongos com colite ulcerativa regulando a expressão de HCN2 em células cromafins intestinais e, assim, afetando a secreção de 5-HT.

关键词

eletroacupuntura; colite ulcerativa; motilidade colônica; células cromafins intestinais; canal catiónico ativado por nucleotídeo cíclico 2; 5-hidroxitriptamina

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