Mecanismo pelo qual a acupuntura regula a via de sinalização cAMP para melhorar a insuficiência ovariana por privação de sono em camundongos

GAN Di ,  

LIU Li-ying ,  

HAO Jian-heng ,  

CHANG Bo-ya ,  

WANG Hai-jun ,  

YANG Jie ,  

摘要

Objetivo: investigar o mecanismo potencial pelo qual a acupuntura melhora a insuficiência ovariana induzida pela privação de sono (SD) em camundongos, regulando a via de sinalização do AMP cíclico (cAMP) com base em transcriptômica. Métodos: camundongos fêmeas C57BL/6 com ciclo estral regular foram aleatoriamente divididos em grupo controle, grupo SD e grupo acupuntura, com 15 animais em cada grupo. O grupo controle manteve um ritmo normal por 6 semanas; os grupos SD e acupuntura foram submetidos a privação de sono por 20 horas diárias, das 16:00 às 12:00 do dia seguinte, durante 6 semanas consecutivas; o grupo acupuntura iniciou o tratamento na 4ª semana, nos pontos "Baihui", "Sanyinjiao" e "Guanyuan" fora do tempo de SD, 20 minutos por sessão, 6 dias por semana, durante 3 semanas consecutivas. As mudanças no ciclo estral foram observadas por esfregaço de células vaginais; a massa corporal, o peso úmido dos ovários foram medidos e o índice ovariano calculado; a morfologia do tecido ovariano foi examinada por coloração de hematoxilina-eosina; os níveis séricos de hormônio folículo-estimulante (FSH), hormônio luteinizante (LH), hormônio antimülleriano (AMH), estradiol (E2) e o conteúdo de cAMP no tecido ovariano foram determinados por ELISA; a transcriptômica foi utilizada para detectar genes diferencialmente expressos (DEG) no tecido ovariano dos grupos e realizar análise funcional; a expressão de mRNA e proteína do receptor de FSH (FSHR), proteína de ligação ao elemento efetor de cAMP (CREB1), subunidade catalítica α da proteína quinase A (PRKACA) e adenilato ciclase 5 (ADCY5) no tecido ovariano foram detectadas por PCR quantitativa em tempo real e western blot, respectivamente. Resultados: após o tratamento, em comparação com o grupo controle, o grupo SD apresentou aumento da taxa de desregulação do ciclo estral (P < 0,01); diminuição da massa corporal, peso úmido ovariano e índice ovariano (P < 0,01); destruição da estrutura morfológica do tecido ovariano com aumento dos folículos atrésicos; aumento nos níveis séricos de FSH e LH (P < 0,01) e diminuição dos níveis de AMH e E2 (P < 0,01). Em comparação com o grupo SD, o grupo acupuntura apresentou redução na taxa de desregulação do ciclo estral (P < 0,01); aumento da massa corporal, peso úmido ovariano e índice ovariano (P < 0,01); melhora na estrutura patológica do tecido ovariano e redução dos folículos atrésicos; diminuição dos níveis séricos de FSH e LH (P < 0,01) e aumento dos níveis de AMH e E2 (P < 0,01). A transcriptômica identificou 173 DEG com tendência regulatória inversa; a análise ontológica indicou que esses DEG estavam principalmente envolvidos em respostas a outros organismos e outros processos biológicos; localizados principalmente na região extracelular e relacionados a funções moleculares como atividade da 2’-5’ oligoadenilato sintetase. A análise de enriquecimento do genoma indicou que esses DEG estavam principalmente envolvidos na via de sinalização do cAMP; a análise de enriquecimento de conjuntos de genes mostrou que a via do cAMP estava inibida no grupo SD e ativada no grupo acupuntura. Em comparação com o grupo controle, os níveis de cAMP ovariano, expressão de mRNA de FSHR, CREB1, ADCY5, PRKACA, níveis de proteína de FSHR, ADCY5, PRKACA e a razão de expressão da proteína fosforilada (p)-CREB1/CREB1 foram significativamente reduzidos no grupo SD (P < 0,01). Em comparação com o grupo SD, o grupo acupuntura mostrou aumento significativo nos níveis de cAMP ovariano, expressão de mRNA de FSHR, CREB1, ADCY5, PRKACA, níveis proteicos de FSHR, ADCY5, PRKACA e razão de expressão de p-CREB1/CREB1 (P < 0,01, P < 0,05). Conclusão: A acupuntura pode melhorar a insuficiência ovariana induzida por SD, e o mecanismo pode estar relacionado à regulação da expressão de moléculas-chave no sinal cAMP, como CREB1, FSHR, ADCY5 e PRKACA.

关键词

Acupuntura; privação de sono; insuficiência ovariana; transcriptômica; genes diferencialmente expressos; via de sinalização do AMP cíclico

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