Estudo do mecanismo pelo qual a eletroacupuntura melhora a dor em ratos com radiculopatia cervical por meio da regulação da proteína Piezo1 na via de sinalização NO/cGMP/PKG

Huang Wenjing ,  

Su Shengyong ,  

Wang Tian ,  

Su Hong ,  

Huang Xinyu ,  

Li Xin ,  

Zheng Guangmei ,  

Yin Lili ,  

Xu Zhiyi ,  

Huang Ying ,  

Wei Gangliang ,  

Li Xiaoming ,  

摘要

Objetivo: investigar o efeito da eletroacupuntura na regulação da proteína Piezo1 em ratos com radiculopatia cervical (CSR) e seu impacto na via de sinalização do óxido nítrico (NO)/monofosfato cíclico de guanosina (cGMP)/proteína quinase G (PKG), explorando o mecanismo analgésico da eletroacupuntura no tratamento da CSR. Métodos: ratos machos SD foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: grupo sham, grupo modelo, grupo eletroacupuntura e grupo eletroacupuntura + Yoda1, com 10 ratos em cada grupo. O modelo CSR foi estabelecido pelo método de inserção de cateter no canal vertebral nos grupos modelo, eletroacupuntura e eletroacupuntura + Yoda1. O grupo eletroacupuntura recebeu tratamento nos pontos bilaterais “Hegu” e “Taichong” com eletroacupuntura, 20 minutos por sessão, uma vez ao dia, por 7 dias consecutivos; o grupo eletroacupuntura + Yoda1 recebeu injeção intraperitoneal do agonista Piezo1 Yoda1 (1,5 mg/kg) antes do tratamento. Antes e depois da intervenção, foram avaliadas a marcha, o limiar de retirada mecânica e a latência da resposta de retirada térmica das rataz; alterações patológicas na medula espinhal foram observadas pela coloração HE; a expressão gênica Piezo1 na medula espinhal foi detectada por qPCR; a expressão de Piezo1 e calmodulina (CaM) foi detectada por coloração dupla imunofluorescente; a expressão das proteínas CaM, sintase de óxido nítrico neuronal (nNOS), guanilato ciclase solúvel (sGC) e PKG1 foi detectada por Western blot; o teor de cGMP da medula foi medido por ELISA; o teor de NO foi determinado pelo método de coloração de nitrito. Resultados: em comparação com o grupo sham, antes da intervenção, o grupo modelo apresentou aumento na pontuação da marcha (P<0.01), diminuição do limiar de retirada mecânica e encurtamento da latência da retirada térmica (P<0.01); aumento significativo da expressão de mRNA de Piezo1, intensidade imunofluorescente de Piezo1 e CaM e sua colocalização positiva, expressão relativa das proteínas CaM, nNOS, sGC, PKG1, e teor de cGMP e NO na medula espinhal (P<0.01); a coloração HE mostrou contração neuronal, escurecimento celular, indistinção dos limites entre núcleo e citoplasma, proliferação de células gliais, aumento da densidade celular e dilatação microvascular com hemorragia. Em comparação com o grupo modelo, o grupo eletroacupuntura apresentou diminuição na pontuação da marcha (P<0.01), aumento do limiar de retirada mecânica e prolongamento da latência da retirada térmica (P<0.01); diminuição da expressão de mRNA de Piezo1, intensidade imunofluorescente de Piezo1 e CaM, expressão relativa das proteínas CaM, nNOS, sGC, PKG1 e teor de cGMP e NO (P<0.01); a coloração HE mostrou contração neuronal individual, menos dilatação microvascular e proliferação glial em comparação ao grupo modelo. Em comparação com o grupo eletroacupuntura, o grupo eletroacupuntura + Yoda1 apresentou encurtamento da latência da retirada térmica (P<0.01); aumento da expressão de mRNA de Piezo1, intensidade imunofluorescente de Piezo1 e CaM, expressão relativa das proteínas CaM, nNOS, sGC, PKG1 e teor de cGMP e NO (P<0.05, P<0.01); a coloração HE mostrou contração neuronal, aumento do número de células gliais e dilatação microvascular parcial com hemorragia. Conclusão: a eletroacupuntura pode aliviar eficazmente a dor em ratos com CSR, possivelmente por inibir a ativação da proteína Piezo1 na medula espinhal e inibir a via de sinalização NO/cGMP/PKG, exercendo efeito analgésico.

关键词

radiculopatia cervical; eletroacupuntura; analgesia; proteína Piezo1

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