Estudo do mecanismo pelo qual a eletroacupuntura melhora a dor de ratos com radiculopatia cervical através da regulação da proteína Piezo1 na via de sinalização NO/cGMP/PKG

Huang Wenjing ,  

Su Shengyong ,  

Wang Tian ,  

Su Hong ,  

Huang Xinyu ,  

Li Xin ,  

Zheng Guangmei ,  

Yin Lili ,  

Xu Zhiyi ,  

Huang Ying ,  

Wei Gangliang ,  

Li Xiaoming ,  

摘要

Objetivo: investigar o efeito regulador da eletroacupuntura na proteína Piezo1 em ratos com radiculopatia cervical (CSR) e a influência na via de sinalização do óxido nítrico (NO)/monofosfato cíclico de guanosina (cGMP)/proteína quinase G (PKG), além de explorar o mecanismo analgésico da eletroacupuntura para CSR. Métodos: ratos machos SD foram divididos aleatoriamente em grupo cirurgia simulada, grupo modelo, grupo eletroacupuntura e grupo eletroacupuntura + Yoda1, 10 ratos por grupo. Modelos CSR foram preparados nos grupos modelo, eletroacupuntura e eletroacupuntura + Yoda1 usando o método de inserção de fio no canal vertebral. O grupo eletroacupuntura recebeu tratamento bilateral com eletroacupuntura nos pontos "Hegu" e "Taichong" durante 20 minutos por sessão, uma vez ao dia, por 7 dias consecutivos; o grupo eletroacupuntura + Yoda1 recebeu injeção intraperitoneal do agonista Piezo1 Yoda1 (1,5 mg/kg) antes do tratamento. Antes e após a intervenção, foram avaliados o escore da marcha, o limiar de retirada mecânica e a latência da resposta de retirada térmica; observações patológicas do tecido da medula espinhal foram feitas com coloração HE; a expressão do gene Piezo1 no tecido da medula espinhal foi medida por qPCR; foi detectada a expressão de Piezo1 e calmodulina (CaM) no tecido da medula espinhal por imunofluorescência dupla; a expressão relativa das proteínas CaM, sintase neuronal de óxido nítrico (nNOS), guanilato ciclase solúvel (sGC) e PKG1 foi detectada por Western blot; o conteúdo de cGMP foi medido por ELISA; o conteúdo de NO na medula espinhal foi determinado pelo método colorimétrico do nitrito. Resultados: comparado ao grupo cirurgia simulada, o grupo modelo apresentou aumento na pontuação da marcha antes da intervenção (P<0,01), diminuição no limiar de retirada mecânica e redução da latência da resposta de retirada térmica (P<0,01); expressão de mRNA Piezo1, intensidade e co-localização da imunofluorescência de Piezo1 e CaM, níveis relativos das proteínas CaM, nNOS, sGC, PKG1, conteúdo de cGMP e NO aumentaram significativamente (P<0,01) no tecido da medula espinhal do grupo modelo; a coloração HE mostrou neurônios contraídos, coloração celular aumentada, limites indistintos entre núcleo e citoplasma, proliferação de células gliais, aumento da densidade celular, dilatação microvascular e hemorragia. Em comparação ao grupo modelo, o grupo eletroacupuntura apresentou diminuição na pontuação da marcha (P<0,01), aumento no limiar de retirada mecânica e prolongamento da latência da resposta de retirada térmica (P<0,01); expressão de mRNA Piezo1, intensidade e co-localização da imunofluorescência de Piezo1 e CaM, níveis relativos das proteínas CaM, nNOS, sGC, PKG1, conteúdo de cGMP e NO foram reduzidos (P<0,01) no tecido da medula espinhal; coloração HE mostrou neurônios contraídos individuais, redução na dilatação microvascular e proliferação glial em comparação ao grupo modelo. Em comparação ao grupo eletroacupuntura, o grupo eletroacupuntura + Yoda1 apresentou redução da latência da resposta de retirada térmica (P<0,01); expressão de mRNA Piezo1, intensidade e co-localização da imunofluorescência de Piezo1 e CaM, níveis relativos das proteínas CaM, nNOS, sGC, PKG1, conteúdo de cGMP e NO aumentaram (P<0,05, P<0,01); coloração HE mostrou neurônios contraídos, aumento no número de células gliais e dilatação microvascular parcial com hemorragia. Conclusão: a eletroacupuntura pode aliviar eficazmente a dor em ratos com CSR, provavelmente por inibir a ativação da proteína Piezo1 na medula espinhal e suprimir a via de sinalização NO/cGMP/PKG, manifestando efeito analgésico.

关键词

radiculopatia cervical; eletroacupuntura; analgesia; proteína Piezo1

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