Estudo do mecanismo regulador da acupuntura na lesão oxidativa do cartilagem na osteoartrite do joelho em coelhos via via de sinalização Sirt1/Nrf2/NQO1

Wang Min ,  

Zhang Zhaoqing ,  

Cao Yuwei ,  

Li Kai ,  

Zhang Zhe ,  

An Kang ,  

Luo Xiaojuan ,  

摘要

O objetivo é observar o efeito da acupuntura com agulha sobre o caminho da sinalização do fator silencioso de regulação de estresse oxidativo na cartilagem do joelho com osteoartrite (KOA) em coelhos domésticos, especificamente o caminho Sirt1 / fator nuclear relacionado a E2 (Nrf2) / NADPH quinona oxidorredutase-1 (NQO1), e explorar o mecanismo pelo qual melhora o dano na cartilagem. Métodos: 24 coelhos machos da raça Nova Zelândia foram aleatoriamente divididos em grupo normal, grupo modelo, grupo de acupuntura com agulha e grupo de acupuntura com agulha + inibidor, com 6 coelhos em cada grupo. Exceto o grupo normal, o modelo KOA foi estabelecido usando o método modificado de Videman. O grupo de acupuntura com agulha realizou liberação por puncionamento nos ligamentos colaterais medial e lateral da perna esquerda, nas faixas de suporte medial e lateral da patela, no ligamento patelar e nos nódulos do feixe de cordas, uma vez por semana durante 4 semanas; no grupo de acupuntura com agulha + inibidor, o inibidor de Sirt1 EX-527 foi injetado intraperitonealmente 30 minutos antes de cada intervenção, uma vez por semana por 4 semanas. Foram realizadas avaliações do Índice de Disfunção de Lequesne (Lequesne MG) e da Medida de Amplitude Passiva de Movimento Articular (PROM) antes da intervenção e uma semana após a última intervenção; uma semana após a última intervenção, foi coletado tecido cartilaginoso para observações patológicas por coloração de hematoxilina-eosina (HE) e safranina O verde (SO); os conteúdos de interleucina-1β (IL-1β) e fator de necrose tumoral-α (TNF-α) no líquido sinovial foram detectados por ELISA; a atividade da superóxido dismutase (SOD) no tecido cartilaginoso foi detectada por método colorimétrico, a atividade da glutationa peroxidase (GSH-Px) pela reação enzimática combinada com coloração de ácido ditiotnitribenzoico, a capacidade antioxidante total (T-AOC) com kit de detecção e o conteúdo de malondialdeído (MDA) pelo método do ácido tio-barbitúrico; o nível de espécies reativas de oxigênio (ROS) no tecido cartilaginoso foi detectado por imunofluorescência; a expressão das proteínas Sirt1, Nrf2, NQO1, ADAMTS-5 e MMP-3 foi detectada por Western blot; a expressão do mRNA de Sirt1, Nrf2 e NQO1 no cartilagem foi detectada por PCR quantitativo em tempo real. Resultados: em comparação com o grupo normal, o grupo modelo apresentou aumento no escore Lequesne MG do joelho esquerdo, conteúdo de IL-1β e TNF-α no líquido sinovial, conteúdo de MDA no cartilagem, níveis de expressão de ROS e níveis de expressão proteica de ADAMTS-5 e MMP-3 (P<0,01), além de aumento na expressão proteica e de mRNA de Nrf2 (P<0,05, P<0,01); PROM, atividade de SOD, GSH-Px, T-AOC e expressão proteica e de mRNA de Sirt1 diminuíram (P<0,01). Em comparação com o grupo modelo, o grupo de acupuntura mostrou diminuição no escore Lequesne MG, conteúdo de IL-1β e TNF-α no líquido sinovial, conteúdo de MDA e expressão de ROS no cartilagem, níveis proteicos de ADAMTS-5 e MMP-3 (P<0,01) e aumento em PROM, atividade de SOD, GSH-Px, T-AOC, expressão proteica e de mRNA de Sirt1, Nrf2 e NQO1 (P<0,01). No grupo de acupuntura com inibidor, o escore Lequesne MG, conteúdo de TNF-α no líquido sinovial, conteúdo de MDA e expressão de ROS diminuíram (P<0,01, P<0,05), enquanto os níveis de mRNA de Sirt1, Nrf2 e NQO1 aumentaram (P<0,01). Em comparação com o grupo de acupuntura, o grupo de acupuntura com inibidor apresentou aumento no escore Lequesne MG, conteúdos de IL-1β e TNF-α, conteúdo de MDA, expressão de ROS e níveis proteicos de MMP-3 e ADAMTS-5 (P<0,01, P<0,05), e diminuição em PROM, atividade de SOD, GSH-Px, T-AOC e expressão proteica e de mRNA de Sirt1, Nrf2 e NQO1 (P<0,01, P<0,05). Os resultados das colorações HE e SO mostraram afinamento da superfície do cartilagem da articulação do joelho, diminuição do número de condrócitos, desordem no arranjo e perda de proteoglicanos no grupo modelo; o grupo de acupuntura apresentou maior quantidade e arranjo ordenado de condrócitos e aumento de proteoglicanos em comparação ao grupo modelo; o grupo de acupuntura com inibidor apresentou agravamento do dano na superfície do tecido cartilaginoso comparado ao grupo de acupuntura. Conclusão: A acupuntura pode melhorar a função articular e as lesões patológicas do cartilagem em coelhos com KOA, provavelmente relacionada à ativação da via de sinalização Sirt1/Nrf2/NQO1, reduzindo o estresse oxidativo e a resposta inflamatória.

关键词

Acupuntura; Osteoartrite do joelho; Função articular do joelho; Via de sinalização Sirt1/Nrf2/NQO1; Estresse oxidativo; Lesão do cartilagem

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