O objetivo é comparar as diferenças nos efeitos da intervenção comportamental e histológica de três métodos de estimulação por eletroacupuntura: ponto único “Zusanli”, ponto único “Sanyinjiao” e a combinação de pontos (“Zusanli” + “Sanyinjiao”) em um modelo murino da síndrome do intestino irritável (SII), bem como as diferenças nas respostas neuronais nos sistemas nervosos periférico e central sob diferentes métodos de estimulação, para fornecer uma base experimental para investigar os mecanismos neurais da intervenção combinada de pontos na SII. Métodos: o modelo animal de SII foi estabelecido por perfusão retal de poliglucano de levedura em camundongos machos C57BL/6J, distribuídos aleatoriamente em grupo controle, grupo modelo, grupo Zusanli, grupo Sanyinjiao e grupo combinado (20 camundongos por grupo, exceto o grupo modelo com 18 camundongos). Após 7 dias consecutivos de estimulação por eletroacupuntura (2 Hz/100 Hz, 1 mA, 15 min por sessão, uma vez ao dia), foi avaliada a hipersensibilidade mecânica abdominal (dor referida) com fibras de von Frey, a capacidade motora pelo teste da barra rotatória, e as características do comportamento fino espontâneo em 3D por meio de análise não supervisionada baseada em inteligência artificial. A estrutura do tecido do cólon e o nível inflamatório foram observados por coloração HE, e a expressão de fatores inflamatórios no tecido colônico foi detectada por Western blot para avaliar a diferença no efeito da estimulação de ponto único versus combinação na melhora dos sintomas da SII. Um vírus marcador foi utilizado para traçar as conexões dos neurônios do gânglio da raiz dorsal (DRG) que inervam os pontos “Zusanli” e “Sanyinjiao” em camundongos C57BL/6J. A resposta dos neurônios DRG aos diferentes pontos de eletroacupuntura (1 mA, 1 min) foi registrada in vivo por imageamento de cálcio com dois fótons em camundongos Thy1-GCaMP6s. A técnica de marcação neuronal dependente de atividade foi usada para analisar os neurônios centrais ativados por eletroacupuntura (2 Hz/100 Hz, 1 mA, 15 min) em camundongos transgênicos (TRAP2; Ai14). Resultados: comparado ao grupo controle, o grupo modelo apresentou aumento no número de retrações mecânicas abdominais e na área sob a curva (P<0.001, P<0.05), diminuição da capacidade motora (latência de queda e velocidade da barra rotatória no momento da queda) (P<0.01), agravamento das lesões teciduais do cólon e resposta inflamatória (P<0.001), aumento da expressão de IL-1β e TNF-α (P<0.001), além de alterações no comportamento espontâneo (P<0.001, P<0.01, P<0.05). Os três métodos de estimulação por eletroacupuntura reduziram significativamente a hipersensibilidade mecânica abdominal em camundongos modelo de SII (P<0.001, P<0.05, P<0.01), sendo a área efetiva de intervenção maior na estimulação combinada do que na pontual. A estimulação combinada foi também mais eficaz em restaurar lesões teciduais do cólon causadas pela SII, reduzir os níveis de expressão de TNF-α (P<0.05), diminuir a duração dos arcos dorsais espontâneos e melhorar a transição entre diferentes comportamentos espontâneos (P<0.01, P<0.05). As respostas neuronais nos DRG exibiram alta heterogeneidade entre os três métodos de estimulação, divididas em 3 categorias principais e 7 subcategorias com base nas características de atividade dos neurônios registrados. Além disso, a estimulação combinada ativou mais neurônios DRG com maior intensidade de sinal de cálcio em comparação com a estimulação pontual (P<0.05). Finalmente, diferenças significativas foram observadas no número de neurônios ativados em diferentes regiões cerebrais com os três métodos de estimulação, com a sobreposição máxima no núcleo paraventricular do hipotálamo (PVN) entre os neurônios ativados pela estimulação dos pontos únicos “Zusanli” e “Sanyinjiao” e pela estimulação combinada, e a sobreposição mínima no córtex insular (IC), sugerindo que a ativação dos neurônios IC requer o efeito sinérgico da estimulação combinada dos pontos. Conclusão: a estimulação combinada “Zusanli” + “Sanyinjiao” melhora melhor a hipersensibilidade mecânica abdominal, lesão estrutural do cólon, estado inflamatório e alterações no comportamento espontâneo induzidas por dor visceral em camundongos modelo de SII comparado à estimulação pontual, e essa vantagem pode dever-se à integração sinérgica dos sinais de eletroacupuntura pelos neurônios periféricos e centrais.

combinação de pontos de acupuntura; eletroacupuntura; síndrome do intestino irritável; Zusanli; Sanyinjiao