Исследование механизма иглотерапии по методике «расслабление печени и умиротворение души» регулирования AMPK-зависимой автофагии для улучшения депрессии после ишемического инсульта

DING Zhi-min ,  

GAO Jing ,  

KANG Wen-lin ,  

WANG Meng-yu ,  

FENG Yi-xuan ,  

WU Ruo-nan ,  

ZHENG Xin-yue ,  

ZHENG Jie ,  

FENG Xiao-dong ,  

摘要

Целью настоящего исследования является изучение влияния иглотерапии по методике «расслабление печени и умиротворение души» на активацию протеинкиназы активированного белка AMPK и экспрессию связанных с автофагией белков в коре лобной доли у крыс-моделей депрессии после ишемического инсульта. Методы. Случайным образом были выбраны 9 крыс породы Sprague-Dawley для проведения фальсифицированной операции. Еще 45 крыс были подвергнуты моделированию блокады/реокклюзии среднецеребральной артерии с использованием метода связывания. После этого крысы были случайным образом разделены на группы: группа с инсультом, группа с депрессией после инсульта, группа с ингибитором, группа с иглотерапией, группа с ингибитором и иглотерапией, по 9 крыс в каждой группе. Все крысы из последних 4 групп были подвергнуты моделированию послеинсультной депрессии с использованием хронического непредсказуемого легкого стресса (CUMS). После успешной моделирования депрессии после ишемического инсульта крысы из группы с ингибитором получили инъекцию ингибитора ампк компаунд С в обеих боковых желудочках мозга (0,1 мкмоль, 10 мкл); крысы из группы с иглотерапией получили иглотерапию точек «иньтан», «байхуй», «хегу», «таичун»: по 30 минут, через каждые 15 минут вращая, 1 раз в день, в течение 14 дней; крысы из группы с ингибитором и иглотерапией после 3 дней приема ингибитора ампк получили иглотерапию в течение 14 дней. Оценка неврологического дефицита проводилась по шкале Longa, поведенческое состояние крыс изучалось с помощью теста предпочтения сахарной воды и открытом поле, микроскопические изменения коры лобной доли фиксировались методом гистологии методом HE, выражение белков AMPK, фосфорилированного (p) -AMPK, Beclin1, P62, связанных с микротрубами белков легкой цепи LC3 II / I определялось методом Western blot, ультраструктура нейронов коры лобной доли изучалась методом трансмиссионной электронной микроскопии. Результаты. В сравнении с группой с фальсифицированной операцией в группе с инсультом общее расстояние движения в течение 5 минут и время пребывания в центральной зоне значительно уменьшились (P <0.01), выражение p-AMPK / AMPK в коре лобной доли уменьшилось (P <0.01). По сравнению с группой с фальсифицированной операцией, в группе с депрессией после инсульта оценка Лонга увеличилась (P <0.01), предпочтение сахарной воды, общее расстояние движения в течение 5 минут и время пребывания в центральной зоне значительно уменьшились (P <0,01); нейроны коры лобной доли на ишемической стороне имели рассеянное расположение, глубоко окрашены, можно было видеть дегенеративные нейроны; выражение p-AMPK / AMPK, Beclin1, LC3 II / I уменьшилось (P <0.01, P <0.05), выражение P62 увеличилось (P <0.01). По сравнению с группой с депрессией после инсульта, в группе с иглотерапией предпочтение сахарной воды, общее расстояние движения в течение 5 минут и время пребывания в центральной зоне значительно увеличились (P <0.01); нейроны коры лобной доли на ишемической стороне имели более упорядоченное расположение, более равные по размеру; выражение p-AMPK / AMPK, Beclin1, LC3 II / I увеличилось (P <0.01), выражение P62 уменьшилось (P <0.05). В сравнении с группой с ингибитором, в группе с ингибитором и иглотерапией предпочтение сахарной воды, общее расстояние движения в течение 5 минут и время пребывания в центральной зоне значительно увеличились (P <0.01); нейроны коры лобной доли на ишемической стороне были слегка отечными, нейроны-мёртвяки уменьшились; выражение p-AMPK / AMPK, Beclin1, LC3 II / I увеличилось (P <0.05, P <0.01), выражение P62 уменьшилось (P <0.01). Результаты трансмиссионной электронной микроскопии показали, что структура нейронов коры лобной доли в группе с фальсифицированной операцией была целой, но у крыс из групп с инсультом, депрессией после инсульта и ингибитором были явно видны патологические изменения, у крыс из групп с иглотерапией и ингибитором и иглотерапией было видно образование типичных автофагосом, общая структура нейронов была приемлемой. Выводы. Иглотерапевтическое лечение по методике «расслабление печени и умиротворение души» может улучшить симптомы депрессии у крыс после ишемического инсульта, его механизм возможно связан с активацией AMPK-зависимой автофагии.

关键词

депрессия после инсульта; иглотерапия; автофагия; протеинкиназа активированного белка

阅读全文