Исследование механизма регулирования выражения miR-335-5p с помощью электроакупунктуры для улучшения повреждения хрящевой ткани коленного сустава у крыс с остеоартрозом коленного сустава
Целью настоящего исследования является изучение защитного эффекта электроакупунктуры на хрящевую ткань коленного сустава у крыс с остеоартрозом коленного сустава (ОАК) и изучение потенциального механизма miR-335-5p при лечении ОАК электроакупунктурой. Методы. Случайным образом SD-крысы были разделены на три группы: группа контроля, группа модели, группа электроакупунктуры, по 14 особей в каждой группе. Произведено внутрисуставное введение раствора глутамината натрия йодной кислоты (80 мг/мл) в правый коленный сустав для создания модели ОАК, после чего через 14 дней после инъекции воспалительного препарата начали проводить электроакупунктурное воздействие на крыс из группы электроакупунктуры на точки "Янлиньян" и "Кровавое море" справа, оставляя иглы на 15 минут, проводя воздействие через день в течение двух недель. Проведено измерение порогового значения механического отражения (PWMT) и времени потайной фазы теплового отражения (PWTL) у крыс; анализ показал, что произошли изменения в адаптации шага при болях. С помощью окрашивания гематоксилином-эозином (HE) были изучены патологические изменения в хрящевой ткани правого коленного сустава; методом ПЦР в режиме реального времени были определены уровни экспрессии мРНК miR-335-5p, связанного с белком-1 (DKK-1), β-катенином (β-катенин) и матричным металлопротеиназой 13 (MMP-13) в хрящевой ткани правого коленного сустава; методом Western blot были определены уровни экспрессии белков DKK-1, β-катенин, MMP-13 в хрящевой ткани; методом иммунофлюоресценции были изучены ярко-зеленые образования в хрящевой ткани правого коленного сустава, связанные с β-катенином. Результат. В хрящевой ткани правого коленного сустава у крыс из группы модели при окраске HE было обнаружено обширное облысение хрящевых клеток, растворение ядра клеток, наличие воспалительных клеток, преимущественно макрофагов, частичное отсутствие хрящевой ткани в локальных областях, некроз костного стержня в локальных областях, увеличение фиброзной ткани, формирование новых капилляров в области увеличения; в группе крыс с электроакупунктурой патологические изменения, такие как воспалительные клетки и увеличение фиброзной ткани, значительно уменьшились. По сравнению с группой контроля, у крыс группы модели уровни мРНК и белков DKK-1 в хрящевой ткани правого коленного сустава снизились (P<0,001); уровни мРНК и белков миР-335-5p, β-катенин и MMP-13 в хрящевой ткани правого коленного сустава увеличились (P<0,001, P<0,01). По сравнению с группой модели, уровни указанных показателей в группе электроакупунктуры развернулись (P<0,001, P<0,05, P<0,01). Вывод. Электроакупунктура способна значительно улучшить симптомы боли у крыс с ОАК, способствовать восстановлению двигательной функции, улучшить патологическую морфологию хрящевой ткани коленного сустава, возможно, это связано с регуляцией экспрессии miR-355-5p, регулированием пути Wnt/β-катенина и ингибированием высвобождения связанного с хрящевым матриксом деградационного фермента.