Улучшение сигнального пути PI3K/AKT/mTOR на основе физиологии репы

WANG Ting ,  

SONG Xiao-ge ,  

RUAN Jing-ru ,  

HAN Xiao-yu ,  

WANG Yu-qing ,  

XIANG Ting-ting ,  

LI Kui-wu ,  

ZHU Jing-wei ,  

FANG Yu-cheng ,  

WANG Zi-ye ,  

CHU Hao-ran ,  

摘要

Целью данного исследования было наблюдение воздействия иглоукалывания на сигнальный путь фосфоинозитид-3-киназа (PI3K) / протеинкиназа B (AKT) / мишень млекопитающих ингибитор рапамицина роста (mTOR) в кишечнике крыс с синдромом раздраженного кишечника с диареей (IBS-D), и изучение воздействия иглоукалывания на уровень автофагии эпителиоцитов тонкой кишки крыс IBS-D и возможные механизмы защиты слизистого кишечника. Методы: 40 крыс SD были случайным образом разделены на нормальную группу, модельную группу, группу иглоукалывания и группу иглоукалывания + LY294002, по 10 крыс в каждой группе. Модель IBS-D была подготовлена методом стимуляции уксусной кислоты + хронического связывания. Группе иглоукалывания было проведено иглоукалывание крыс по 20 мм на обеих сторонах "Тянъцзю" и "Великий пустой"; группе иглоукалывания + LY294002 было сделано внутрибрюшное введение ингибитора PI3K LY294002 (0,75 мг / кг) за 30 минут до иглоукалывания. Обе группы были вмешаны один раз в день в течение 7 дней подряд. Перед моделированием, после и после вмешательства, было измерено минимальное количество воды, впрысканное крысам в каждой группе, при достижении 3-х баллов вытягивания брюшной части тела (AWR). Наблюдались воспалительные повреждения слизистой оболочки толстого кишечника крыс с использованием метода окрашивания тканей HE; под электронным микроскопом изучалась структура слизистой оболочки толстого кишечника, количество аутофагосом и другие показатели. Методика Вестерн-блотинга использовалась для изучения экспрессии белков объединения клеток (Occludin), белков связи 1 (ZO-1). 2, белка p62, отношения фосфорилированный протеинкиназ B (p-PI3K/PI3K), (p-AKT/AKT), (p-mTOR/mTOR), отношения световые цепи микротрубок (LC)3B-Ⅱ/Ⅰ, а также в реальном времени PCR использовался для изучения уровня экспрессии мРНК PI3K, AKT, mTOR, Occludin, ZO-1, Claudin-2. Результаты: В сравнении с нормальной группой, минимальное количество воды, впрысканное крысам в группе модели, снизилось (P<0,01), эпителиоциты кишки были неоднородно размещены, обнаружено локальное воспаление клеток, под микроскопом видно множество автофагосом, оценена эффективность отношения фосфорилированный протеинкиназ B (p-PI3K/PI3K), (p-AKT/AKT), мTOR/mTOR, выражены белки Occludin, ZO-1, p62, уровни экспрессии mRNA PI3K, AKT, mTOR, Occludin, ZO-1 снизились (P<0,01), выражения белков Claudin-2 и легкая цепь микротрубок (LC)3B-Ⅱ/Ⅰ увеличились (P<0,01). По сравнению с модельной группой, минимальное количество воды, впрысканное крысам в группе иглоукалывания, увеличилось (P<0,05), структура слизистой оболочки уменьшилась относительно целостности, воспаление клеток уменьшилось, количество автофагосом снизилось, отношения фосфорилированный пи3к/PI3K);(p-AKT/AKT);(p-mTOR/mTOR), Occludin, ZO-1, p62, уровней экспрессии mRNA PI3K, AKT, mTOR, Occludin, ZO-1 относительно увеличились (P<0,01), выражения белков Claudin-2 и LC3B-Ⅱ/Ⅰ уменьшились (P<0,01). В сравнении с группой иглоукалывания, структура слизистой оболочки кишки крыс группы иглоукалывания + LY294002 относительно нарушилась, воспаление клеток увеличилось, количество автофагосом увеличилось, все остальные показатели различного уровня были обратно коррелированы (P<0,01, P<0,05) . Вывод: иглоукалывание, возможно, через активацию сигнального пути PI3K/AKT/mTOR, снижает уровень автофагии эпителиоцитов кишки крыс с IBS-D, тем самым уменьшая повреждение эпителиоцитов кишки крыс с IBS-D и защищая слизистый барьер кишки.

关键词

синдром раздраженного кишечника с диареей; иглоукалывание; внутренняя боль; фосфоинозитид-3-киназа (PI3K) / протеинкиназа B (AKT) / мишень млекопитающих ингибитор рапамицина роста (mTOR); слизистый барьер кишечника; автофагия

阅读全文