Изучение механизма действия электроакупунктуры точек ног по меридиану малой яркой ян в улучшении воспалительной реакции у крыс с постменопаузальным остеопорозом на основе сигнального пути PI3K/AKT
Цель исследования - изучить влияние электроакупунктуры точек ног по меридиану малой яркой ян на воспалительный ответ у крыс с постменопаузальным остеопорозом посредством регуляции сигнального пути фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K)/протеинкиназы B (AKT). Методика: 40 крыс SD были случайным образом распределены, из них 10 - в группу ложной операции; у остальных через 3 месяца после двусторонней овариэктомии была создана модель постменопаузального остеопороза и разделены на модельную группу, группу электроакупунктуры и группу электроакупунктуры с ингибитором, по 10 животных в каждой. В группе электроакупунктуры выполняли электроакупунктуру на двусторонних точках "Хуаньтяо" и "Янлинцюань" (импульсные волны, частота 2 Гц/15 Гц, интенсивность 0,2~0,6 мА) с прокалыванием точки "Сюаньчжун" по 10 минут каждый раз, 5 раз в неделю, в течение 8 недель с чередованием сторон. В группе электроакупунктуры с ингибитором дополнительно вводили внутрибрюшинно ингибитор PI3K LY294002 (10 мг/кг) дважды в неделю в течение 8 недель. Микро-КТ использовался для оценки микроархитектуры бедренной кости и количественных показателей, включая плотность костной ткани (BMD), отношение объема костной ткани к полному объему (BV/TV), количество костных трабекул (Tb.N), расстояние между трабекулами (Tb.Sp). Гематоксилин-эозин окраска использовалась для изучения патологии бедренной кости, окраска TRAP - для подсчета остеокластов. Иммуногистохимическое окрашивание применялось для выявления маркеров остеогенеза Runx2, остеокальцина (OCN), коллагена I типа (Collagen I). Методом ELISA и количественного ПЦР в реальном времени определяли содержание и экспрессию мРНК интерлейкина-1β (IL-1β), интерлейкина-6 (IL-6), фактора некроза опухоли-α (TNF-α) в сыворотке и костной ткани. Западный блот использовался для оценки белковой экспрессии PI3K/AKT пути в бедренной кости. Результаты: в модельной группе наблюдалось значительное истончение костных трабекул, расстройство их расположения, расширение костномозговой полости и значительное увеличение количества остеокластов; в группе электроакупунктуры структура трабекул улучшалась, количество остеокластов снижалось. По сравнению с ложной операционной группой в модельной группе снижались BMD, BV/TV, Tb.N, положительная экспрессия Runx2, OCN, Collagen I в костной ткани, соотношение экспрессии белков p-PI3K/PI3K и p-AKT/AKT значительно снижалось (P < 0.01), при этом увеличивались Tb.Sp, содержание и экспрессия мРНК IL-6, IL-1β, TNF-α в сыворотке и ткани кости (P < 0.01). По сравнению с модельной группой в группе электроакупунктуры отмечалось значительное повышение BMD, BV/TV, Tb.N, положительной экспрессии Runx2, OCN, Collagen I и соотношения p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT (P < 0.01, P < 0.05), значительное снижение Tb.Sp, содержания и мРНК IL-6, IL-1β, TNF-α (P < 0.01). По сравнению с группой электроакупунктуры в группе электроакупунктуры + ингибитор показатели, за исключением Tb.Sp, изменялись в обратном направлении (P < 0.01, P < 0.05). Заключение: электроакупунктура точек ног по меридиану малой яркой ян уменьшает воспалительный ответ и потерю костной ткани у крыс с постменопаузальным остеопорозом, что может быть связано с активацией пути PI3K/AKT.
关键词
Электроакупунктура; точки ног малой яркой ян меридиана; путь фосфатидилинозитол-3-киназы/протеинкиназы B; остеопороз; воспалительный ответ