На основе AMPK/ULK1 пути сигнала изучение регулирования автофагии митохондрий крыс с хроническим синдромом усталости горячей иглотерапией

YUAN Yi-na ,  

LIU Di ,  

LIU Jun-wei ,  

LI Hua-yuan ,  

LI Long ,  

WU Yong-li ,  

摘要

Целью данного исследования является наблюдение за влиянием горячего иглотерапии на сигнальный путь аденилаткиназы (AMPK)/Унк-51 подобной киназы 1 (ULK1) в скелетной мускулатуре крыс с хроническим синдромом усталости (CFS) и исследование механизмов вмешательства горячей иглотерапии в CFS. Метод: В данном исследовании использовали самцов крыс SD согласно случайной цифровой таблице для разделения на две группы: пустая группа (10 крыс) и моделирующая группа (30 крыс). Моделирующая группа использовала метод сложного моделирования, включающего изматывающее плавание, длительное одиночество и длительное полуденное постное время для размножения модели крыс CFS. Успешно размноженные 30 крыс из моделирующей группы случайным образом разделили на модельную группу, группу горячей иглотерапии и группу кофермента, в каждой группе по 10 крыс. Группа горячей иглотерапии выбрала точки крыс зу сан ли, гуань юань и чжун уань для горячей иглотерапии, по 15 минут каждый раз, раз в день, в течение 14 дней подряд. Группе кофермента давали жидкость кофермента Q10 (1 мг/кг-1) для порции пищи, раз в день, в течение 14 дней подряд. Записали изменения массы тела и время плавания до моделирования и после вмешательства и оценили изменения поведения каждой группы крыс на месте зависания, исследовали изменения в форме и ткани скелетной мускулатуры крыс с использованием окраски HE; через электронный микроскоп провели наблюдения структуры митохондрий и автофагии в скелетной мускулатуре; с помощью метода вестерн-блот тест-системы измеряли уровни экспрессии белков AMPK, фосфорилированного-AMPK (p-AMPK), ULK1, фосфорилированного-ULK1 (p-ULK1), микротрубочной связанной белка 1 легкой цепи 3 (LC3)-I и LC3- II в скелетной мускулатуре крыс и рассчитывали соотношения p-AMPK/AMPK, p-ULK1/ULK1, LC3-II/LC3-I; с помощью метода реального времени РЦР измеряли уровни экспрессии мРНК AMPK, ULK1 и LC3 в скелетной мускулатуре крыс. Результаты: По сравнению с пустой группой, крысы из модельной группы потеряли массу тела (P<0.05), время плавания уменшилось, а число стояний и вертикальных перемещений в широком столе значительно уменшились (P<0.05); по сравнению с модельной группой, крысы из группы горячей иглотерапии и группы кофермента приобрели вес (P<0.05), увеличилось время плавания и число стояний и вертикальных перемещений в широком столе (P<0.05). Группа горячей иглотерапии и группа кофермента изменили уровень экспрессии белка p-ULK1/ULK1 и LC3-II/LC3-I в скелетной мускулатуре по сранению с модельной группой (P<0.05). По сравнению с пустой группой, уровни экспрессии мРНК ULK1 и LC3 в скелетной мускулатуре крыс из модельной группы возрастали (P<0.05), митохондрии скелетной мускулатуры имели пустоту, выраженный отек; по сранению с модельной группой, уровни экспрессии мРНК AMPK, ULK1 и LC3 в скелетной мускулатуре крыс из группы горячей иглотерапии и группы кофермента возрасли (P<0.05), у крыс из группы кофермента отек скелетной мускулатуры немного смягчился, а у крыс из группы горячей иглотерапии пустоты митохондрий скелетной мускулатуры уменшились значительно, а отек выразился менее выраженно. Выводы: Путем вмешательства горячей иглотерапии в CFS крыс активируется сигнальный путь AMPK/ULK1, повышается экспрессия факторов AMPK, ULK1, LC3, стимулируется аутофагия митохондрий и улучшается форма митохондрий, что способствует лечению хронического синдрома усталости.

关键词

хронический синдром усталости; путь сигнала AMPK/ULK1; горячая иглотерапия; автофагия митохондрий; скелетная мускулатура

阅读全文