Двухфотонная микроскопия благодаря своей способности проникать в глубокие ткани, низкой фототоксичности, высокой пространственной разрешающей способности, устойчивости к светорассеянию и длинному рабочему расстоянию стала идеальным инструментом для визуализации живых тканей, глубоких структур и толстых прозрачных образцов, широко применяемым в биомедицинских исследованиях. Однако применение данной технологии в исследованиях акупунктуры находится на начальной стадии. Учитывая большой потенциал двухфотонной микроскопии в исследованиях акупунктуры, в статье систематически изложены принципы и технические преимущества этой технологии, а также рассмотрены последние достижения в применении в области акупунктуры. Кроме того, предложена инновационная интеграционная стратегия для исследований акупунктуры, основанная на объединении вторичной гармонической генерации, оптогенетики, генетического редактирования и технологий прозрачности тканей. Также приведены конкретные рекомендации по получению высококачественных изображений с помощью двухфотонного микроскопа с целью продвижения глубокого применения этой технологии в исследованиях акупунктуры, обеспечивая живое и динамическое наблюдение эффектов акупунктуры и предоставляя мощную техническую поддержку для раскрытия механизмов ее действия.