Исследование механизма регуляции электропунктурой сигнального пути IL-4/JAK1/STAT6 для улучшения поляризации макрофагов M2 и повреждения кишечного слизистого барьера у мышей с язвенным колитом

HU Xiao-mei ,  

ZHANG Hong ,  

TANG Ya-si ,  

PAN Yan-ying ,  

ZHUO Yue ,  

DENG Shi-feng ,  

YI Xi-qin ,  

摘要

Цель — наблюдение влияния электропунктуры на сигнальный путь интерлейкина-4 (IL-4) / тирозинкиназы 1 (JAK1) / транскрипционного активатора и трансдуктора сигнала 6 (STAT6) в ткани толстой кишки у мышей с моделью хронического язвенного колита (UC), а также исследование возможного механизма, с помощью которого электропунктура способствует поляризации макрофагов типа M2 и улучшает повреждение кишечного слизистого барьера у мышей с UC. Использовали 8-недельных BALB/c мышей SPF уровня, поровну самцов и самок, стратифицированных по полу, рандомизированных на контрольную группу (15 особей) и модельную группу (41 особь). Модель хронического UC индуцировали путем приема 3% раствора полидекстрозосульфата натрия (DSS), успешные модели случайным образом разделили на группу модели, группу электропунктуры + 11B11 и группу электропунктуры. Каждая группа включала по 12 мышей. В группе электропунктуры + 11B11 внутриперитонеально вводили ингибитор IL-4 11B11 (10 мг/кг) перед электропунктурой; в группе электропунктуры проводили иглоукалывание в точки "Гуаньюань", "Тяньшу", "Цзу Сан Ли" и "Шан Цюй" по 20 мин за сеанс; вмешательства выполнялись один раз в день в течение 14 дней подряд. По окончании вмешательства оценивали: ① улучшение симптомов: включая оценку индекса активности заболевания (DAI), макроскопическую оценку толстой кишки и гистопатологические изменения ткани толстой кишки после окраски ГЭ; ② структуру и функцию кишечного слизистого барьера: исследование структуры плотных контактов в толстой кишке под трансмиссионным электронным микроскопом, живая визуализация проникновения кишечника с помощью FITC-4D, иммуннофлюоресцентное выявление экспрессии белков замыкательных полосок ZO-1 и окклюдина; ③ активацию сигнального пути IL-4/JAK1/STAT6: определение относительного уровня экспрессии белков IL-4, фосфорилированного (p)-JAK1/JAK1 и p-STAT6/STAT6 методом вестерн-блоттинга; ④ маркеры поляризации макрофагов M2: определение соотношения CD206+/CD86+ в мезентериальных лимфатических узлах методом проточной цитометрии, иммуннофлюоресцентное выявление CD206 и аргиназы-1 (Arg-1) в ткани толстой кишки. По сравнению с контрольной группой в модельной группе показатели DAI и макроскопической оценки значительно повысились (P<0.05), структура слизистой толстой кишки была нарушена, наблюдалось выраженное кишечное флуоресцентное проникновение, экспрессия ZO-1 и окклюдина значительно снизилась (P<0.05), относительный уровень белков IL-4, p-JAK1/JAK1 и p-STAT6/STAT6 снизился (P<0.05), соотношение CD206+/CD86+ и экспрессия CD206 и Arg-1 уменьшились (P<0.05). По сравнению с модельной группой в группе электропунктуры оценки DAI и макроскопии уменьшились (P<0.05), структура слизистой улучшилась, кишечное флуоресцентное проникновение уменьшилось, экспрессия ZO-1 и окклюдина значительно повысилась (P<0.05), относительный уровень белков IL-4, p-JAK1/JAK1 и p-STAT6/STAT6 повысился (P<0.05), соотношение CD206+/CD86+ и экспрессия CD206 и Arg-1 увеличились (P<0.05). По сравнению с группой электропунктуры в группе электропунктуры + 11B11 оценки DAI и макроскопии снизились (P<0.05), структура слизистой была нарушена, кишечное флуоресцентное проникновение выражено, экспрессия ZO-1 и окклюдина значительно снизилась (P<0.05), относительный уровень белков IL-4, p-JAK1/JAK1 и p-STAT6/STAT6 снизился (P<0.05), соотношение CD206+/CD86+ и экспрессия CD206 и Arg-1 также снизились (P<0.05). Вывод: электропунктура может способствовать восстановлению слизистого барьера толстой кишки у мышей с хроническим UC, улучшать диарею, ректальное кровотечение и другие симптомы, механизмы связаны с активацией сигнального пути IL-4/JAK1/STAT6 и индукцией поляризации макрофагов типа M2 в ткани толстой кишки.

关键词

электропунктура;язвенный колит;кишечный слизистый барьер;макрофаги типа M2;сигнальный путь интерлейкина-4/тирозинкиназы-1/транскрипционного активатора STAT6

阅读全文