Механизм улучшения боли у крыс с корешковой цервикальной спондилопатией посредством регулирования сигнального пути NO/cGMP/PKG белком Piezo1 под воздействием электропунктуры

HUANG Wen-jing ,  

SU Sheng-yong ,  

WANG Tian ,  

SU Hong ,  

HUANG Xin-yu ,  

LI Xin ,  

ZHENG Guang-mei ,  

YIN Li-li ,  

XU Zhi-yi ,  

HUANG Ying ,  

WEI Gang-liang ,  

LI Xiao-ming ,  

摘要

Целью исследования было изучение регуляторного влияния электропунктуры на белок Piezo1 у крыс с корешковой цервикальной спондилопатией (CSR) и её эффекта на сигнальный путь оксида азота (NO)/циклического гуанозинмонофосфата (cGMP)/протеинкиназы G (PKG), а также исследование механизма обезболивания при лечении CSR электропунктурой. Методы: самцы крыс SD были случайным образом разделены на группы ложной операции, модельную группу, группу электропунктуры и группу электропунктуры + Yoda1, по 10 животных в каждой. Модель CSR у крыс в группах модельной, электропунктуры и электропунктуры + Yoda1 создавалась методом введения нитей в позвоночный канал. В группе электропунктуры воздействовали на двусторонние точки «Хэгу» и «Тайчун», 20 минут за сеанс, ежедневно в течение 7 дней подряд; группе электропунктуры + Yoda1 предварительно вводили внутрибрюшинно агонист Piezo1 Yoda1 (1,5 мг/кг), затем проводили лечение электропунктурой. Оценивали походку, порог механического укорочения лапы и латентность тепловой реакции до и после вмешательства электропунктурой; патологические изменения в ткани спинного мозга изучали методом окраски HE; экспрессию гена Piezo1 оценивали с помощью qPCR; экспрессию Piezo1 и кальмодулина (CaM) — методом двойного иммунного флуоресцентного окрашивания; белки CaM, nNOS, sGC и PKG1 анализировали методом вестерн-блоттинга; содержание cGMP измеряли методом ELISA; количество NO — методом колориметрии нитритов. Результаты: по сравнению с группой ложной операции до вмешательства у крыс модельной группы показатели походки ухудшались (P<0,01), снижался порог механической укороченности и сокращалась латентность тепловой реакции (P<0,01); уровни mRNA Piezo1, интенсивность иммунной флуоресценции Piezo1 и CaM, относительная экспрессия белков CaM, nNOS, sGC, PKG1, содержание cGMP и NO были значительно повышены (P<0,01); окраска HE выявила у модельных крыс спинной мозг с сокращёнными нейронами, усиленным окрашиванием клеток, нечетким разделением ядер и цитоплазмы, пролиферацией глиальных клеток, увеличением плотности клеток, расширением микро сосудов и кровоизлияниями. В сравнении с модельной группой у крыс, получавших электропунктуру, улучшались показатели походки (P<0,01), повышался порог механического укорочения, увеличивалась латентность тепловой реакции (P<0,01); снижалась экспрессия mRNA Piezo1, интенсивность флуоресценции Piezo1 и CaM, относительный уровень белков CaM, nNOS, sGC, PKG1, а также содержание cGMP и NO (P<0,01); окраска HE показала менее выраженный нейронный фрагментационный эффект, уменьшение микро сосудистых расширений и пролиферации глиальных клеток. По сравнению с группой электропунктуры, в группе электропунктуры + Yoda1 латентность тепловой реакции сокращалась (P<0,01), а экспрессия mRNA Piezo1, интенсивность иммунной флуоресценции Piezo1 и CaM, уровни белков CaM, nNOS, sGC, PKG1, содержание cGMP и NO повышались (P<0,05, P<0,01); окраска HE выявила сокращённые нейроны, увеличенное количество глиальных клеток и частичные кровоизлияния в микро сосудах. Вывод: Электропунктура эффективно облегчает боль у крыс с CSR, возможно, за счёт подавления активации белка Piezo1 в спинном мозге и ингибирования сигнального пути NO/cGMP/PKG, тем самым проявляя анальгезирующий эффект.

关键词

Корешковая цервикальная спондилопатия; электропунктура; обезболивание; белок Piezo1

阅读全文