Цель исследования – на основе уточнения безопасности тромболиза с помощью иглоукалывания за пределами стандартного временного окна у моделей ишемического инсульта у крыс выявить механизм, посредством которого иглоукалывание повышает безопасность тромболиза, подавляя сигнальный путь рецептор-связывающих протеинкиназ 1 (RIPK1)/3 (RIPK3) и субстрата смешанного рода киназоподобного белка (MLKL), участвующего в программируемом некротическом клеточном гибели. Методы: 33 крысы SD были случайным образом отнесены к группе ложной операции, а 99 успешных моделей рандомизированы на группу модели, группу тромболиза через 6 часов и группу иглоукалывание + тромболиз через 6 часов, по 33 крысы в каждой. За исключением группы ложной операции, в остальных группах моделировалась ишемия методом эндогенного тромботического эмболизма. Группа тромболиза через 6 часов получала внутривенную терапию рекомбинантным тканевым активатором плазминогена через 6 часов после моделирования; группа иглоукалывания + тромболиз одновременно с тромболизом получала акупунктуру на двусторонних точках "Нэйгуань" и "Шуйгоу" с удержанием игл в течение 20 минут. Оценивалась неврологическая функция с помощью шкалы Бедерсона, измерялся объем инфаркта мозга окраской 2,3,5-трифенилтетразолия, определялась проницаемость гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) методом эванс-блю, содержание воды в мозге методом объемной плотности, концентрация гемоглобина в ишемической мозговой ткани спектрофотометрией, экспрессия белков RIPK1, RIPK3 и фосфорилированного p-MLKL методом вестерн-блот, уровни mRNA RIPK1, RIPK3 и MLKL определялись количественной ПЦР в реальном времени, локализация p-MLKL и эндотелиальных клеток – методом двойного иммунного флюоресцентного окрашивания. Результаты: после моделирования у крыс значительно снижался кровоток, через 2 часа после моделирования увеличивались неврологические баллы (P<0.01). Через 24 часа по сравнению с группой ложной операции наблюдалось увеличение неврологических баллов, объема инфаркта и проницаемости ГЭБ (P<0.01), повышение уровня белка RIPK1 (P<0.05), mRNA RIPK1, RIPK3, MLKL (P<0.01, P<0.05) и увеличение процента p-MLKL/эндотелиоцитарных колокализированных клеток (P<0.01) в зоне полутени ишемии. По сравнению с модельной группой 6-часовая тромболитическая терапия увеличила проницаемость ГЭБ, содержание воды и концентрацию гемоглобина в мозге (P<0.01, P<0.05), повысила уровень белков RIPK3 и p-MLKL (P<0.05), mRNA RIPK3 и MLKL (P<0.05) и процент p-MLKL/эндотелиоцитов (P<0.01). По сравнению с модельной группой иглоукалывание + 6-часовой тромболиз снизили неврологические баллы, инфарктный объем, проницаемость ГЭБ и содержание воды в мозге (P<0.01, P<0.05), уровень белка и mRNA RIPK1 (P<0.05), процент p-MLKL/эндотелиоцитов (P<0.05). По сравнению с 6-часовой тромболитической терапией иглоукалывание + тромболиз уменьшило неврологические баллы, объем инфаркта, проницаемость ГЭБ, содержание воды и концентрацию гемоглобина (P<0.01), снижало экспрессию белков RIPK1, RIPK3 и p-MLKL (P<0.05, P<0.01), mRNA RIPK1, RIPK3, MLKL (P<0.01, P<0.05) и процент p-MLKL/эндотелиоцитов (P<0.01). Заключение: своевременное вмешательство иглоукалыванием улучшает неврологические функции после тромболиза у крыс с ишемическим инсультом, уменьшает объем инфаркта, снижает проницаемость ГЭБ, уменьшает осложнения тромболиза и таким образом повышает безопасность тромболитической терапии; механизм может быть связан с подавлением иглоукалыванием программируемого некроза эндотелиальных клеток, опосредованного сигнальным путем RIPK1/RIPK3/MLKL.

иглоукалывание;ишемический инсульт;программируемый некроз;безопасность тромболиза