Целью исследования является наблюдение за влиянием метода иглоукалывания "Пробуждение мозга и раскрытие сознания" на сигнальный путь обменника гуанозин нуклеотидов 1 (Epac1)/белка Rap1 в зоне ишемического полутени (IP) коры головного мозга у крыс с моделью окклюзии/реперфузии средней мозговой артерии (MCAO/R), а также изучение молекулярного механизма данного метода иглоукалывания на восстановление гематоэнцефалического барьера (BBB) и облегчение церебрального ишемически-реперфузионного повреждения (CIRI). В исследовании использовали 84 самца крыс SD, случайно разделенных на группы: фиктивная операция, модель, иглоукалывание, иглоукалывание + ESI-09 (ингибитор Epac1), по 21 крысе в каждой. За исключением фиктивной операции, в остальных группах была создана модель правосторонней MCAO/R методом модифицированного зондирования с помощью нити. В группе иглоукалывания применяли метод "Пробуждение мозга и раскрытие сознания" на точках "Шуйгоу" и двухсторонних "Нэйгуань", в группе иглоукалывания + ESI-09 после реперфузии вводили интраперитонеально ESI-09 (10 мг/кг) с тем же методом иглоукалывания. Лазерная допплеровская спекл-доплерография контролировала мозговой кровоток (до ишемии, 2 часа ишемии, 2 часа после реперфузии); по модифицированной шкале Бедерсона оценивали неврологический дефицит (через 24 часа после реперфузии); методом окраски тетразолиевым синим (TTC) измеряли процент объема инфаркта мозга; влажно-сухим методом определяли водное содержание в правом мозге; окраской Эванса блю (EB) оценивали проницаемость BBB коры правого мозга; вестерн-блотом и количественной ПЦР определяли экспрессию белков и мРНК Epac1, Rap1 в зоне IP коры правого мозга; иммунофлюоресцентным методом определяли процент площади колокализации F-актина и адгезивного молекулы эндотелиальных тромбоцитов (CD31, маркер эндотелиальных клеток) в зоне IP коры правого мозга; трансмиссионной электронной микроскопией изучали ультраструктуру BBB в зоне IP коры правого мозга. Результаты показали, что во всех группах, кроме фиктивной операции, мозговой кровоток снижался менее чем на 70% от базового уровня после ишемии и восстанавливался более чем на 70% через 2 часа после реперфузии, что свидетельствует об успешности модели. Через 24 часа после реперфузии в группе модели по сравнению с фиктивной операцией наблюдалось увеличение неврологических баллов, процента объема инфаркта, содержания воды в мозге и содержания EB (P<0,01); снижалась экспрессия белков и мРНК Epac1, Rap1 в зоне IP коры правого мозга (P<0,05, P<0,01); увеличивалась площадь колокализации F-актина и CD31 (P<0,01); базальная мембрана BBB была нечеткой, прерывистой, участки плотных контактов (TJ) растворялись или отсутствовали. В сравнении с модельной группой все перечисленные показатели повреждения улучшались в группе иглоукалывания (P<0,01); повышалась экспрессия белков и мРНК Epac1, Rap1 в зоне IP коры правого мозга (P<0,01); снижалась площадь колокализации F-актина и CD31 (P<0,01); базальная мембрана BBB была непрерывной, структура TJ плотной. В сравнении с группой иглоукалывания в группе иглоукалывания + ESI-09 отмечалось возвращение показателей повреждения (P<0,01); снижалась экспрессия белков и мРНК Epac1, Rap1 в зоне IP коры правого мозга (P<0,01); увеличивалась площадь колокализации F-актин и CD31 (P<0,01); базальная мембрана BBB оставалась нечеткой, участки TJ растворялись. Вывод: метод иглоукалывания "Пробуждение мозга и раскрытие сознания" регулирует сигнальный путь Epac1/Rap1 в зоне IP коры головного мозга, индуцирует перестройку цитоскелета эндотелиальных клеток и облегчает повреждение BBB после CIRI.

Иглоукалывание; сигнальный путь Epac1/Rap1; гематоэнцефалический барьер; ишемическо-реперфузионное повреждение мозга; перестройка цитоскелета эндотелиальных клеток