Estudio sobre el mecanismo de la acupuntura de "regulación hepática y espíritu" para regular la autofagia dependiente de AMPK para mejorar la depresión post-AVC isquémico

DING Zhi-min ,  

GAO Jing ,  

KANG Wen-lin ,  

WANG Meng-yu ,  

FENG Yi-xuan ,  

WU Ruo-nan ,  

ZHENG Xin-yue ,  

ZHENG Jie ,  

FENG Xiao-dong ,  

摘要

El objetivo del estudio fue observar el efecto de la acupuntura de "regulación hepática y espíritu" sobre la activación de la proteína kinasa activada por el monofosfato de adenosina (AMPK) y la expresión de las proteínas relacionadas con la autofagia en la corteza prefrontal de las ratas modelo de depresión post-AVC isquémico, y discutir el mecanismo de acción de la acupuntura de "regulación hepática y espíritu" para mejorar la depresión post-AVC isquémico. Los métodos incluyeron la selección aleatoria de nueve ratas SD como grupo de falsa operación, y otras 45 ratas para establecer un modelo de ligadura con alambre para bloquear y reperfusión la arteria cerebral media (MCAO/R) por método de MCAO/R. Después de la exitosa construcción del modelo MCAO/R, las ratas fueron distribuidas aleatoriamente en grupo de AVC, grupo de depresión post-AVC, grupo de inhibidor, grupo de acupuntura y grupo de acupuntura + inhibidor, con nueve ratas en cada grupo. Los siguientes cuatro grupos de ratas fueron sometidos a estrés crónico impredecible y moderado (CUMS) para construir un modelo de PSD isquémica. Después de la exitosa construcción del modelo de depresión post-AVC isquémico, el grupo de inhibidores recibió una inyección intraventricular bilateral del inhibidor de AMPK Compound C (0.1 μmol, 10 μL); el grupo de acupuntura recibió acupuntura en "Yintang," "Baihui," "Hegu," y "Taichong," durante 30 minutos cada vez, girando cada 15 minutos, una vez al día, durante 14 días continuos; el grupo de acupuntura + inhibidores recibió tratamiento de acupuntura después de una inyección de inhibidor de AMPK durante 3 días. Se utilizó el método de puntuación de Longa para evaluar los déficits neurológicos, se utilizó la experiencia de preferencia por solución dulce y la experiencia de exploración para evaluar el comportamiento de las ratas, y se utilizó la tinción HE para observar los cambios morfológicos en la corteza prefrontal. Se utilizó el método de Western blot para detectar la expresión de las proteínas AMPK, fosfo (p)-AMPK, Beclin1, P62, y la cadena ligera de microtúbulos 3 (LC3) II/I en la corteza prefrontal, y la microscopía electrónica de transmisión se utilizó para observar la ultraestructura de las neuronas corticales prefrontales. Los resultados mostraron que en comparación con el grupo de falsa operación, el grupo de AVC mostró una disminución significativa en la distancia total recorrida en 5 minutos y el porcentaje de tiempo pasado en la zona central (P<0.01), una disminución en la expresión de p-AMPK/AMPK en la corteza prefrontal (P<0.01). En comparación con el grupo de falsa operación, el grupo de depresión post-AVC mostró un aumento en la puntuación de Longa (P<0.01), una disminución en la preferencia por la solución dulce, la distancia total recorrida en 5 minutos y el porcentaje de tiempo pasado en la zona central (P<0.01); las neuronas isquémicas en la corteza prefrontal estaban dispuestas de manera suelta, con núcleos fuertemente coloreados, y neuronas degenerativas necróticas observadas; la expresión de p-AMPK/AMPK, Beclin1, y LC3II/I en la corteza prefrontal disminuyó (P<0.01, P<0.05), mientras que la expresión de P62 aumentó (P<0.01). En comparación con el grupo de depresión post-AVC, el grupo de acupuntura mostró un aumento significativo en la preferencia por la solución dulce, la distancia total recorrida en 5 minutos y el porcentaje de tiempo pasado en la zona central (P<0.01); las neuronas isquémicas en la corteza prefrontal estaban más uniformemente dispuestas, de tamaño y forma más uniformes; la expresión de p-AMPK/AMPK, Beclin1, y LC3 II/I aumentó (P<0.01), mientras que la expresión de P62 disminuyó (P<0.05). En comparación con el grupo de inhibidores, el grupo de acupuntura + inhibidores mostró un aumento significativo en la preferencia por la solución dulce, la distancia total recorrida en 5 minutos y el porcentaje de tiempo pasado en la zona central (P<0.01); las neuronas isquémicas en la corteza prefrontal estaban ligeramente infladas, con menos neuronas necróticas observadas; la expresión de p-AMPK/AMPK, Beclin1, y LC3 II/I aumentó (P<0.05, P<0.01), mientras que la expresión de P62 disminuyó (P<0.01). Los resultados de la microscopía electrónica de transmisión mostraron que las neuronas de la corteza prefrontal del grupo de falsa operación estaban estructuradas de manera intacta, mientras que las neuronas de los grupos de AVC, depresión post-AVC, e inhibidores mostraban cambios patológicos evidentes, y que se formaron cuerpos de autofagia típicos en los grupos de acupuntura y acupuntura + inhibidores, con una estructura neuronal globalmente preservada. En conclusión, el tratamiento de acupuntura de "regulación hepática y espíritu" puede mejorar los síntomas de la depresión post-AVC isquémico en la rata, y su mecanismo podría estar asociado a la activación de la autofagia dependiente de AMPK.

关键词

Depresión post-AVC; Acupuntura; Autofagia; Proteína kinasa activada por la adenosina

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