Estudio del efecto de la electroacupuntura en la autofagia hepática de ratones obesos basada en la vía AMPK/mTOR/ULK1

ZHANG Ying-rong ,  

ZHOU Zhong-yu ,  

XIA Jun-ni ,  

WANG Yi-fei ,  

ZHANG Zi-yi ,  

LIAO Lu-lu ,  

WANG Jia-jie ,  

摘要

El objetivo es investigar el efecto de la electroacupuntura en la regulación de la vía de señalización de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK)/la diana de la rapamicina en mamíferos (mTOR)/la quinasa activadora de la autofagia similar a unc-51 (ULK1) sobre la autofagia hepática en ratones obesos. Métodos: ratones C57BL/6J fueron asignados aleatoriamente en grupo normal, grupo modelo y grupo de electroacupuntura, con 8 ratones por grupo. Se estableció un modelo de ratones obesos mediante alimentación con dieta alta en grasas. El grupo de electroacupuntura recibió intervención bilateral en los puntos “Zusanli” y “Tianshu” durante 30 minutos por sesión, 5 veces por semana, durante 4 semanas. Se observaron cambios en el índice de Lee y masa corporal antes y después del tratamiento; se midió la glucemia en ayunas; se realizó la prueba de tolerancia a la insulina y se calculó el área bajo la curva (AUC); mediante ELISA se detectaron insulina en ayunas y contenido sérico de lipoproteínas de baja densidad (LDL-C), lipoproteínas de alta densidad (HDL-C), colesterol total (TC) y triglicéridos (TG), calculándose el índice de resistencia a la insulina; se pesaron el tejido adiposo blanco mesentérico y tejido hepático; se observaron cambios morfológicos en tejidos de grasa blanca mesentérica e hígado mediante tinción HE; se observó el depósito lipídico en tejido hepático con tinción Oil Red O; mediante microscopía electrónica de transmisión se examinó la ultraestructura hepática; se detectó expresión proteica de p-AMPK/AMPK, p-mTOR/mTOR, ULK1, LC3-II, Atg5, Atg7 y SQSTM1/p62 por Western blot; se cuantificó la expresión de ARNm de AMPK, mTOR, ULK1, LC3-II, Atg5, Atg7 y p62 mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Resultados: comparado con el grupo normal, el grupo modelo mostró un aumento significativo en el índice de Lee, masa corporal, glucemia en ayunas, insulina en ayunas, índice de resistencia a la insulina y valor AUC de la prueba de tolerancia a la insulina (P < 0.01), incremento en TG, TC y LDL-C séricos (P < 0.01), disminución de HDL-C sérico (P < 0.01), aumento en masa de tejido adiposo blanco abdominal y hepático (P < 0.01); el diámetro de adipocitos en tejido adiposo blanco mesentérico se incrementó notablemente, disminuyendo el número de células por unidad de área; los hepatocitos estaban agrandados, desordenados, con abundantes vacuolas lipídicas; se observaron grandes depósitos lipídicos de color naranja; las mitocondrias estaban arrugadas y las autofagosomas disminuidas; la expresión de ARNm AMPK y proteína p-AMPK/AMPK en tejido hepático disminuyó (P < 0.01), mientras que mRNA mTOR y proteína p-mTOR/mTOR aumentaron (P < 0.01), con expresión disminuida de mRNA y proteína ULK1, LC3-II, Atg5 y Atg7 (P < 0.01) y aumento de p62 mRNA y proteína (P < 0.01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de electroacupuntura mostró una disminución significativa en índice de Lee, masa corporal, glucemia en ayunas, insulina en ayunas, índice de resistencia a la insulina y valor AUC (P < 0.01), reducción en TG, TC y LDL-C séricos (P < 0.01), aumento en HDL-C sérico (P < 0.01), disminución en masa de tejido adiposo blanco abdominal y hepático (P < 0.01, P < 0.05); el diámetro de adipocitos disminuyó y el número de células por unidad de área aumentó; no se observaron vacuolas lipídicas evidentes en hepatocitos; se redujeron depósitos lipídicos de color naranja; la estructura mitocondrial era normal y aumentaron los autofagosomas, observándose algunos autolisosomas y autofagosomas; la expresión de ARNm AMPK y proteína p-AMPK/AMPK aumentó (P < 0.01), mientras que mRNA y proteína mTOR y p-mTOR/mTOR disminuyeron (P < 0.01), con aumento en ARNm y proteína ULK1, LC3-II, Atg5 y Atg7 (P < 0.01) y reducción en p62 mRNA y proteína (P < 0.01). Conclusión: La electroacupuntura en "Zusanli" y "Tianshu" puede promover la autofagia hepática en ratones obesos, posiblemente mediante la regulación de la vía de señalización AMPK/mTOR/ULK1.

关键词

obesidad; electroacupuntura; vía de señalización AMPK/mTOR/ULK1; autofagia

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