Estudio del mecanismo de la electroacupuntura para mejorar la motilidad colónica en ratones con colitis ulcerosa basado en el canal catiónico activado por nucleótido cíclico

Li Sihui ,  

Huang Qianhui ,  

Huang Qin ,  

Wu Qiaofeng ,  

Yu Shuguang ,  

摘要

Objetivo: observar el mecanismo por el cual la electroacupuntura en "Shangjuxu" mejora el trastorno de la motilidad del colon en ratones con colitis ulcerosa (CU) a través del canal catiónico activado por nucleótido cíclico 2 (HCN2). Métodos: ratones machos C57BL/6J distribuidos aleatoriamente en grupo blanco, grupo modelo y grupo de electroacupuntura, con 8 ratones en cada uno; se estableció un modelo de CU mediante administración oral de sulfato de dextrano. El grupo de electroacupuntura fue tratado en la acupuntura "Shangjuxu" con una duración diaria de 20 minutos durante 7 días consecutivos. Se calculó la tasa de cambio de la masa corporal y se evaluó el índice de actividad de la enfermedad (DAI); se observó la alteración patológica del colon mediante tinción HE; se evaluaron los cambios de motilidad colónica in vivo y ex vivo mediante técnicas electrofisiológicas; se compararon el tiempo de tránsito colónico y la tasa de propulsión intestinal; se detectó la expresión de HCN2, 5-hidroxitriptamina (5-HT), triptófano hidroxilasa (TPH1) y transportador de 5-HT (SERT) por inmunofluorescencia; se evaluaron los niveles de mRNA y proteína de TPH1 y SERT mediante PCR cuantitativa en tiempo real y Western blot. Ratones Vil1MerCreMer se dividieron aleatoriamente en grupo vector e inducido, con 8 ratones cada uno. Se realizó la eliminación condicional específica del gen HCN2 en el epitelio intestinal de los ratones Vil1MerCreMer. El grupo inducido recibió inyecciones de tamoxifeno a 5 mg/mL. Se midieron los niveles de 5-HT y nucleótidos cíclicos (cAMP) en suero de ratones Vil1MerCreMerHCN2fl/fl mediante ELISA. Las células RIN-14B se dividieron en grupo normal y grupo transfectado, el cual presentaba una expresión reducida de HCN2. Se detectaron 5-HT y cAMP en el sobrenadante celular mediante ELISA. Se determinó la expresión de mRNA de HCN2 y TPH1 en células RIN-14B mediante PCR en tiempo real. Resultados: en comparación con el grupo blanco, el grupo modelo mostró un estado general deteriorado, con un aumento significativo en la tasa de cambio de peso corporal y elevación del DAI (P<0.001), desorganización de la estructura de la mucosa colónica con edema e infiltración inflamatoria evidente, y aumento en la puntuación patológica (P<0.001); reducción en la frecuencia, amplitud y área bajo la curva del movimiento colónico in vivo y ex vivo (P<0.001), prolongación del tiempo de tránsito colónico y disminución en la tasa de propulsión intestinal (P<0.001); aumento en la expresión de HCN2 en el colon (P<0.001), con co-localización con 5-HT; elevación en la expresión de 5-HT, TPH1 y SERT en el colon (P<0.001). La electroacupuntura revirtió estos efectos (P<0.001, P<0.01, P<0.05). Tras la eliminación condicional de HCN2 en el epitelio intestinal, los niveles de 5-HT y cAMP en suero del grupo inducido disminuyeron (P<0.001). Tras la reducción de HCN2 en células RIN-14B, la expresión de mRNA de HCN2 y TPH1 disminuyó (P<0.001), y los niveles de 5-HT y cAMP en el sobrenadante celular descendieron (P<0.001). Conclusión: la electroacupuntura en "Shangjuxu" podría mejorar la motilidad intestinal en ratones con colitis ulcerosa mediante la regulación de la expresión de HCN2 en células cromafines intestinales, afectando así la secreción de 5-HT.

关键词

electroacupuntura; colitis ulcerosa; motilidad colónica; células cromafines intestinales; canal catiónico activado por nucleótido cíclico 2; 5-hidroxitriptamina

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