Mecanismo de la acupuntura para regular la vía de señalización cAMP y mejorar la insuficiencia ovárica inducida por privación de sueño en ratones

GAN Di ,  

LIU Li-ying ,  

HAO Jian-heng ,  

CHANG Bo-ya ,  

WANG Hai-jun ,  

YANG Jie ,  

摘要

El objetivo fue explorar el mecanismo potencial por el cual la acupuntura mejora la insuficiencia ovárica inducida por la privación de sueño (SD) en ratones mediante la regulación de la vía de señalización del AMP cíclico (cAMP) basada en transcriptómica. Métodos: ratones hembras C57BL/6 con ciclo estral regular fueron asignados aleatoriamente a grupo control, grupo SD y grupo de acupuntura, con 15 ratones en cada grupo. El grupo control mantuvo un horario normal durante 6 semanas; los grupos SD y acupuntura fueron sometidos a 20 horas diarias de privación de sueño desde las 16:00 hasta las 12:00 del día siguiente durante 6 semanas consecutivas; el grupo de acupuntura comenzó el tratamiento desde la cuarta semana en los puntos "Baihui", "Sanyinjiao" y "Guanyuan" fuera del tiempo de SD, cada sesión de 20 minutos, 6 días por semana, durante 3 semanas consecutivas. Se observaron los cambios en el ciclo estral mediante frotis de células vaginales; se midió la masa corporal, peso húmedo de ovarios y se calculó el índice ovárico; se examinó la morfología del tejido ovárico con tinción de hematoxilina y eosina; se determinaron los niveles séricos de hormona foliculoestimulante (FSH), hormona luteinizante (LH), hormona antimülleriana (AMH), estradiol (E2) y contenido de cAMP en tejido ovárico mediante ELISA; se utilizó transcriptómica para detectar genes diferencialmente expresados (DEG) en tejido ovárico y se realizó análisis funcional; la expresión de ARNm y proteína del receptor de FSH (FSHR), proteína unida a elemento efector de cAMP (CREB1), subunidad catalítica α de proteína quinasa A (PRKACA) y adenilato ciclasa 5 (ADCY5) en tejido ovárico se detectaron por PCR cuantitativa en tiempo real y Western blot respectivamente. Resultados: después del tratamiento, en comparación con el grupo control, el grupo SD mostró mayor tasa de desorganización del ciclo estral (P < 0.01); disminución de masa corporal, peso húmedo ovárico e índice ovárico (P < 0.01); daño en la morfología ovárica y aumento de folículos atrésicos; aumento en niveles séricos de FSH y LH (P < 0.01) y disminución de AMH y E2 (P < 0.01). En comparación con el grupo SD, el grupo de acupuntura mostró reducción en la tasa de desorganización del ciclo estral (P < 0.01); aumento de masa corporal, peso húmedo ovárico e índice ovárico (P < 0.01); mejora en la estructura patológica ovárica con reducción de folículos atrésicos; disminución de niveles séricos de FSH y LH (P < 0.01) y aumento de AMH y E2 (P < 0.01). La transcriptómica identificó 173 DEG con tendencias de regulación inversa; el análisis ontológico mostró que los DEG se involucraban principalmente en respuestas a otros organismos y otros procesos biológicos; principalmente localizados en regiones extracelulares y asociados con funciones moleculares como la actividad de la oligoadenilato sintasa 2’-5’. El análisis de enriquecimiento genómico mostró que los DEG participaban principalmente en la vía de señalización cAMP; el análisis de enriquecimiento de conjuntos de genes mostró que la vía cAMP estaba inhibida en el grupo SD y activada en el grupo de acupuntura. En comparación con el grupo control, el contenido de cAMP ovárico, expresión de ARNm de FSHR, CREB1, ADCY5, PRKACA, niveles proteicos de FSHR, ADCY5, PRKACA y relación de expresión de p-CREB1/CREB1 se redujeron significativamente en el grupo SD (P < 0.01). En comparación con el grupo SD, el contenido de cAMP ovárico, expresión de ARNm de FSHR, CREB1, ADCY5, PRKACA, niveles proteicos de FSHR, ADCY5, PRKACA y relación de p-CREB1/CREB1 aumentaron significativamente en el grupo de acupuntura (P < 0.01, P < 0.05). Conclusión: la acupuntura puede mejorar la insuficiencia ovárica inducida por SD, posiblemente mediante la regulación de la expresión de moléculas clave como CREB1, FSHR, ADCY5 y PRKACA en la vía de señalización cAMP.

关键词

Acupuntura; privación de sueño; insuficiencia ovárica; transcriptómica; genes diferencialmente expresados; vía de señalización de AMP cíclico

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