Estudio del mecanismo regulador de la punción con aguja sobre el daño oxidativo del cartílago en la osteoartritis de rodilla de conejos mediante la vía de señalización Sirt1/Nrf2/NQO1

Wang Min ,  

Zhang Zhaoqing ,  

Cao Yuwei ,  

Li Kai ,  

Zhang Zhe ,  

An Kang ,  

Luo Xiaojuan ,  

摘要

El objetivo es observar el efecto de la punción con aguja de cortante sobre la vía de señalización del regulador silencioso del estrés oxidativo en el cartílago de la osteoartritis de rodilla (KOA) en conejos domésticos, específicamente la vía Sirt1 / factor nuclear relacionado con el factor E2 2 (Nrf2) / NADPH quinona oxidorreductasa-1 (NQO1), y explorar el mecanismo por el cual mejora el daño del cartílago. Métodos: 24 conejos machos neozelandeses se dividieron aleatoriamente en un grupo normal, un grupo modelo, un grupo de punción con aguja y un grupo de punción con aguja + inhibidor, con 6 conejos por grupo. Excepto el grupo normal, se estableció un modelo KOA utilizando el método modificado de Videman. El grupo de punción con aguja eligió ligamentos colaterales medial y lateral de la extremidad inferior izquierda, bandas de soporte medial y lateral de la rótula, ligamento rotuliano y nodos de banda para realizar liberación por punción con aguja, una vez por semana durante 4 semanas; el grupo punción con aguja + inhibidor recibió una inyección intraperitoneal del inhibidor de Sirt1 EX-527 30 minutos antes de cada intervención, una vez por semana durante 4 semanas. Se realizaron evaluaciones del Índice de Disfunción de Lequesne (Lequesne MG) y la medición del rango pasivo de movimiento articular (PROM) antes de la intervención y a la semana después de la última intervención; una semana después de la última intervención, se tomó tejido cartilaginoso para observaciones patológicas mediante tinciones de hematoxilina-eosina (HE) y safranina O-verde (SO); se detectaron los contenidos de interleucina-1β (IL-1β) y factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) en el líquido articular mediante ELISA; la actividad de la superóxido dismutasa (SOD) en tejido cartilaginoso se detectó por método colorimétrico, la actividad de la glutatión peroxidasa (GSH-Px) mediante reacción enzimática combinada con tinción de ácido ditiotnitribenzoico, la capacidad antioxidante total (T-AOC) mediante kit de detección y el contenido de malondialdehído (MDA) por método de ácido tiobarbitúrico; el nivel de especies reactivas de oxígeno (ROS) en tejido cartilaginoso se detectó por inmunofluorescencia; la expresión de proteínas Sirt1, Nrf2, NQO1, ADAMTS-5 y MMP-3 se detectó mediante Western blot; la expresión de ARNm de Sirt1, Nrf2 y NQO1 en el cartílago se detectó mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Resultados: en comparación con el grupo normal, el grupo modelo mostró aumento en la puntuación Lequesne MG en la rodilla izquierda, contenido de IL-1β, TNF-α en líquido articular y contenido de MDA en cartílago, niveles de expresión de ROS, y niveles de expresión proteica de ADAMTS-5 y MMP-3 (P<0.01), así como aumento en la expresión proteica y de ARNm de Nrf2 (P<0.05, P<0.01); PROM, actividad de SOD, GSH-Px y T-AOC en cartílago y expresión proteica y de ARNm de Sirt1 disminuyeron (P<0.01). En comparación con el grupo modelo, el grupo de punción con aguja mostró disminución en la puntuación Lequesne MG, contenido de IL-1β y TNF-α en líquido articular, contenido de MDA y expresión de ROS en cartílago, niveles de proteína ADAMTS-5 y MMP-3 (P<0.01), y aumento en PROM, actividad de SOD, GSH-Px y T-AOC, expresión proteica y de ARNm de Sirt1, Nrf2 y NQO1 (P<0.01). En el grupo de punción con aguja + inhibidor, la puntuación Lequesne MG, contenido de TNF-α en líquido articular, contenido de MDA y expresión de ROS disminuyeron (P<0.01, P<0.05), mientras que la expresión de ARNm de Sirt1, Nrf2 y NQO1 aumentó (P<0.01). En comparación con el grupo de punción con aguja, el grupo de punción con aguja + inhibidor mostró aumento en la puntuación Lequesne MG, contenido de IL-1β y TNF-α, contenido de MDA, expresión de ROS, y niveles proteicos de MMP-3 y ADAMTS-5 (P<0.01, P<0.05), y disminución en PROM, actividad de SOD, GSH-Px y T-AOC, expresión proteica y de ARNm de Sirt1, Nrf2 y NQO1 (P<0.01, P<0.05). Los resultados de las tinciones HE y SO mostraron adelgazamiento de la superficie del cartílago de la articulación de la rodilla, reducción en el número de condrocitos, desorden en la disposición y pérdida de proteoglicanos en el grupo modelo; el grupo de punción con aguja mostró mayor cantidad y disposición ordenada de condrocitos y aumento de proteoglicanos en comparación con el grupo modelo; el grupo de punción con aguja + inhibidor mostró un agravamiento del daño en la superficie del tejido cartilaginoso en comparación con el grupo de punción con aguja. Conclusión: la punción con aguja puede mejorar la función articular y las lesiones patológicas del cartílago en conejos con KOA, posiblemente mediante la activación de la vía de señalización Sirt1/Nrf2/NQO1 que atenúa el estrés oxidativo y la respuesta inflamatoria.

关键词

Punción con aguja; osteoartritis de rodilla; función articular de rodilla; vía de señalización Sirt1/Nrf2/NQO1; estrés oxidativo; daño del cartílago

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