摘要:目的:观察电针对骨癌痛-吗啡耐受大鼠痛行为的影响,探讨电针抗骨癌痛大鼠吗啡耐受效应的作用机制。方法:通过胫骨内接种MRMT-1乳腺癌细胞(3×104个)诱发骨癌痛,联合腹腔注射盐酸吗啡注射液(10mg·kg4个)诱发骨癌痛,联合腹腔注射盐酸吗啡注射液(10mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1),分两次注射,连续注射11d)建立骨癌痛-吗啡耐受大鼠模型。第1部分:23只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、骨癌痛组(n=9)、吗啡耐受组(n=8)。第2部分:61只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=11)、骨癌痛组(n=11)、吗啡耐受组(n=13)、电针组(n=13)和假电针组(n=13)。成功诱导吗啡耐受后1d(接种癌细胞后第22天)电针,于每日第1次吗啡腹腔注射后即刻电针,穴位选用双侧"足三里"和"昆仑",每次30min,每日1次,连续治疗7d。于癌细胞接种前和接种后10、11、21、22、24、26和28d时检测大鼠患侧机械缩足阈(PWTs);胫骨X线及HE染色观察胫骨组织形态;免疫荧光组织化学法(IHC)检测大鼠蓝斑核(LC)内μ阿片受体(MOR)、Rab5阳性细胞表达及其共表达情况。结果:癌细胞接种后10d,骨癌痛组、吗啡耐受组、电针组和假电针组大鼠PWTs均显著低于同期假手术组(P<0.01);接种后21d(即吗啡持续注射后11d),4组大鼠PWTs均显著低于同期假手术组(P<0.01);接种后22~28d(即电针1~7d),电针组大鼠患侧PWTs显著高于同期骨癌痛组、吗啡耐受组和假电针组(P<0.01)。X线结果显示骨癌痛大鼠左侧胫骨近端上1/3处骨皮质破坏,呈不连续状,且局部软组织可见明显肿胀。HE染色结果显示,假手术组大鼠胫骨结构完整,骨髓腔内未见MRMT-1癌细胞;骨癌痛组和吗啡耐受组骨髓腔内见大量MRMT-1癌细胞。IHC结果显示:骨癌痛组、吗啡耐受组大鼠LC内MOR、Rab5阳性细胞率及MOR(-1),分两次注射,连续注射11d)建立骨癌痛-吗啡耐受大鼠模型。第1部分:23只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、骨癌痛组(n=9)、吗啡耐受组(n=8)。第2部分:61只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=11)、骨癌痛组(n=11)、吗啡耐受组(n=13)、电针组(n=13)和假电针组(n=13)。成功诱导吗啡耐受后1d(接种癌细胞后第22天)电针,于每日第1次吗啡腹腔注射后即刻电针,穴位选用双侧"足三里"和"昆仑",每次30min,每日1次,连续治疗7d。于癌细胞接种前和接种后10、11、21、22、24、26和28d时检测大鼠患侧机械缩足阈(PWTs);胫骨X线及HE染色观察胫骨组织形态;免疫荧光组织化学法(IHC)检测大鼠蓝斑核(LC)内μ阿片受体(MOR)、Rab5阳性细胞表达及其共表达情况。结果:癌细胞接种后10d,骨癌痛组、吗啡耐受组、电针组和假电针组大鼠PWTs均显著低于同期假手术组(P<0.01);接种后21d(即吗啡持续注射后11d),4组大鼠PWTs均显著低于同期假手术组(P<0.01);接种后22~28d(即电针1~7d),电针组大鼠患侧PWTs显著高于同期骨癌痛组、吗啡耐受组和假电针组(P<0.01)。X线结果显示骨癌痛大鼠左侧胫骨近端上1/3处骨皮质破坏,呈不连续状,且局部软组织可见明显肿胀。HE染色结果显示,假手术组大鼠胫骨结构完整,骨髓腔内未见MRMT-1癌细胞;骨癌痛组和吗啡耐受组骨髓腔内见大量MRMT-1癌细胞。IHC结果显示:骨癌痛组、吗啡耐受组大鼠LC内MOR、Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+/Rab5+阳性率均低于假手术组(P<0.01);吗啡耐受组大鼠LC内Rab5阳性细胞率及MOR+阳性率均低于假手术组(P<0.01);吗啡耐受组大鼠LC内Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+/Rab5+阳性率均低于同期骨癌痛组(P<0.05);电针组大鼠LC内MOR、Rab5阳性细胞率及MOR+阳性率均低于同期骨癌痛组(P<0.05);电针组大鼠LC内MOR、Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+/Rab5+阳性率均显著高于同期骨癌痛组、吗啡耐受组和假电针组(P<0.01)。结论:电针可缓解骨癌痛-吗啡耐受大鼠的机械痛阈,部分翻转吗啡耐受现象;该效应可能与其提高大鼠LC内MOR表达、促进MOR内吞有关。Objective To observe the effect of electroacupuncture(EA)on pain behavior and expression of!-opioid receptor(MOR)and Rab5(an important protein molecule for internalization of MOR)in the locus coeruleus(LC)region in bone cancer pain(BCP)rats with morphine tolerance(MT),so as to explore its mechanisms underlying improvement of BCP and MT.Methods The present study included two parts.In the first part,23 female SD rats were randomized into sham BCP(n=6),BCP(n=9)and BCP+MT(n=8)groups,and in the second part,61 female SD rats were randomized into 5 groups:sham BCP(n=11),BCP(n=11),BCP+MT(n=13),BCP+MT+EA(n=13)and BCP+MT+sham EA(n=13).The BCP morphine tolerance(BCP+MT)model was established by injection of 10 !L of human Walker 256 breast cancer cells(MRMT-1 breast cancer cells,1 x10+阳性率均显著高于同期骨癌痛组、吗啡耐受组和假电针组(P<0.01)。结论:电针可缓解骨癌痛-吗啡耐受大鼠的机械痛阈,部分翻转吗啡耐受现象;该效应可能与其提高大鼠LC内MOR表达、促进MOR内吞有关。
摘要:目的:观察电针"神门""三阴交"对失眠大鼠下丘脑室旁核(PVN)能量代谢的影响,探讨电针治疗失眠症的中枢调节机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组22只。模型组和电针组采用慢性束缚法束缚15d复制失眠模型。电针组电针"神门""三阴交",每日1次,每次15min,治疗5d。用24h小动物自发活动数据采集系统检测大鼠24h自发活动量,以负重力竭游泳实验检测大鼠负重力竭游泳时间,采用蛋白免疫印迹法检测PVN内的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达,酶联免疫法检测PVN内的乙酰辅酶A(Ac-CoA)、钠-钾三磷酸腺苷酶(Na+-K+-ATPase)含量以及血浆皮质酮(CORT)含量,透射电镜观察PVN的细胞结构。结果:与正常组比较,模型组大鼠白天活动量增多、夜晚活动量减少(P<0.05),负重力竭游泳时间缩短(P<0.05);PVN内AMPK表达增强(P<0.05)、Ac-CoA和Na+-K+-K+-ATPase含量降低(P<0.05),血浆CORT含量降低(P<0.05);电镜下可见模型大鼠PVN内线粒体肿胀,核糖体部分消失。电针后,与模型组比较,电针组大鼠白天活动量减少、夜晚活动量增多(P<0.05),负重力竭游泳时间延长(P<0.05);PVN内AMPK表达减弱(P<0.05)、Ac-CoA和NA+-ATPase含量降低(P<0.05),血浆CORT含量降低(P<0.05);电镜下可见模型大鼠PVN内线粒体肿胀,核糖体部分消失。电针后,与模型组比较,电针组大鼠白天活动量减少、夜晚活动量增多(P<0.05),负重力竭游泳时间延长(P<0.05);PVN内AMPK表达减弱(P<0.05)、Ac-CoA和NA+-K+-K+-ATPase含量升高(P<0.05),血浆CORT含量升高(P<0.05);PVN内线粒体仅轻度肿胀。结论:电针"神门""三阴交"对失眠大鼠下丘脑室旁核能量代谢有良好调整作用,通过调节下丘脑室旁核AMPK表达、Ac-CoA和Na+-ATPase含量升高(P<0.05),血浆CORT含量升高(P<0.05);PVN内线粒体仅轻度肿胀。结论:电针"神门""三阴交"对失眠大鼠下丘脑室旁核能量代谢有良好调整作用,通过调节下丘脑室旁核AMPK表达、Ac-CoA和Na+-K+-K+-ATPase含量,电针可以有效改善失眠及失眠后疲劳症状。Objective To observe the effect of electroacupuncture(EA)at"Shenmen"(HT7)and"Sanyinjiao"(SP6)on energy metabolism in paraventricular nucleus(PVN)of hypothalamus in insomnia rats,so as to explore its mechanism underlying improvement of insomnia.Methods A total of 66 SD rats(half male and half female)were randomized into 3 groups:normal control,model and EA groups(n=22 per group).The insomnia model was established by binding the rat for at least 4 h(step increase of 30 min per day),once daily for 15 days.EA(5 Hz/25 Hz,0.5-1.0 mA)was applied to unilateral HT7 and SP6 for 15 min,once daily for 5 days.The rats' spontaneous activities during day and night were recorded by using the ClockLab Data Collection and Analysis System,and the duration of exhausted swimming was detected by using load-bearing endurance swimming test.The expression of adenosine 5′-monophosphate(AMP)-activated protein kinase(AMPK)of PVN tissue was assayed by Western blot,and the contents of acetyl coenzyme A(Ac-CoA)and Na+-ATPase含量,电针可以有效改善失眠及失眠后疲劳症状。
摘要:目的:基于核磁共振氢谱技术(1 H NMR)观察电针"内关"穴预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠血清代谢物及其代谢通路的影响,从代谢组学角度探讨电针预处理对MIRI大鼠产生保护作用的机制。方法:雄性SD大鼠48只随机分为正常组、模型组、电针内关组(内关组)、电针合谷组(合谷组),每组12只。采用结扎冠状动脉左前降支40min后恢复血流1h制备MIRI大鼠模型。两电针组造模前每天予电针相应穴位30min,连续7d。模型制备成功后,收集各组大鼠血清,利用1 H NMR进行代谢物检测,利用最小二乘分析、正交偏最小二乘分析进行模式识别。结果:在造模后,模型组、电针组大鼠心电图均表现出T波高耸,R波与T波间无明显ST段。再灌注后T波下降超过0.2mV,无明显ST段。与正常组比较,模型组大鼠血清代谢模式发生明显改变,乙酰乙酸、乳酸、肌酸、丙三醇、葡萄糖升高,丙氨酸、谷氨酰胺、甘油磷酸胆碱、磷酸胆碱降低。与模型组比较,内关组大鼠血清代谢模式发生明显改变,表现为葡萄糖上升,亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、三羟基丁酸、乳酸、醋酸盐、丙酮、乙酰乙酸、丙酮酸、谷氨酰胺、肌酸、丙三醇下降;合谷组与模型组代谢模式无显著差异。结论:电针"内关"预处理明显改变了MIRI大鼠糖代谢、丙酮酸代谢、氨基酸代谢、酮体代谢、能量代谢的模式,电针"内关"可能通过调节丙酮酸、氨基酸、酮体、能量等对MIRI大鼠起到一定的预保护作用。
摘要:目的:观察头针对局灶性脑缺血大鼠海马旁回白介素(IL)-10mRNA、IL-6mRNA及肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响,探讨头针治疗急性缺血性脑血管病的分子生物学机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组及头针组,每组16只。采用线栓法建立急性局灶性脑缺血大鼠模型。药物组予二硫代氨基甲酸吡咯烷100mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1)腹腔注射,1次/d,共7d;头针组于双侧顶颞前斜线行快速捻转透刺治疗,留针20min,1次/d,共7d。干预前后对各组大鼠进行神经功能缺损评分(NDS)和神经行为学评分(NS)。荧光定量PCR法检测大鼠海马旁回IL-10mRNA、IL-6mRNA的表达,免疫组化法检测海马旁回TNF-α的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠NDS和NS明显升高(P<0.01),海马旁回IL-10mRNA、IL-6mRNA、TNF-α表达明显增高(P<0.01)。与本组治疗前比较,头针组和药物组大鼠NDS和NS明显降低(P<0.01)。治疗后与模型组比较,头针组和药物组大鼠NDS和NS明显降低(P<0.05),海马旁回IL-10mRNA表达明显增高(P<0.05),IL-6mRNA、TNF-α表达明显降低(P<0.05)。结论:促进缺血后海马旁回IL-10的表达,从而抑制IL-6、TNF-α等促炎细胞因子的表达是头针治疗急性缺血性脑血管病的分子机制之一。Objective To observe the effect of scalp-acupuncture intervention on the expression of Interleukin(IL)-10 mRNA,IL-6 mRNA and tumor necrosis factor(TNF)-αin the parahippocampal gyrus of cerebral ischemia(CI)rats,so as to explore its molecular mechanisms underlying improvement of CI.Methods A total of 64 male SD rats were randomized into normal control,model,medication and scalp-acupuncture groups(n=16 rats in each group).The focal CI model was established by middle cerebral artery occlusion.Intraperitoneal injection of Ammonium Pyrrolidine Dithiocarbamate(100 mg·kg(-1)腹腔注射,1次/d,共7d;头针组于双侧顶颞前斜线行快速捻转透刺治疗,留针20min,1次/d,共7d。干预前后对各组大鼠进行神经功能缺损评分(NDS)和神经行为学评分(NS)。荧光定量PCR法检测大鼠海马旁回IL-10mRNA、IL-6mRNA的表达,免疫组化法检测海马旁回TNF-α的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠NDS和NS明显升高(P<0.01),海马旁回IL-10mRNA、IL-6mRNA、TNF-α表达明显增高(P<0.01)。与本组治疗前比较,头针组和药物组大鼠NDS和NS明显降低(P<0.01)。治疗后与模型组比较,头针组和药物组大鼠NDS和NS明显降低(P<0.05),海马旁回IL-10mRNA表达明显增高(P<0.05),IL-6mRNA、TNF-α表达明显降低(P<0.05)。结论:促进缺血后海马旁回IL-10的表达,从而抑制IL-6、TNF-α等促炎细胞因子的表达是头针治疗急性缺血性脑血管病的分子机制之一。