摘要:目的:观察隔药饼灸对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠血乳酸(BLA)及腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(AMPK/PGC-1α)信号通路的影响,探讨隔药饼灸治疗CFS的部分作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、假药饼灸组和中药灌胃组,每组10只。采用慢性束缚与力竭游泳交替进行21 d的复合应激造模方法复制CFS大鼠模型。隔药饼灸组以逍遥散组方的药物制成药饼,于大鼠“神阙”“关元”“足三里”“期门”进行隔药饼灸,每穴灸5壮;假药饼灸组用赋形剂制备的假药饼,每穴灸5壮;中药灌胃组选择逍遥散悬浊液(60 mg·kg(-1))灌服。以上干预均每日1次,共10 d。旷场实验与悬尾实验评价各组大鼠行为学变化;ELISA法检测大鼠血清中BLA、趋化因子CXC配体9(CXCL9)及β-内啡肽(β-EP)含量;HE染色法观察大鼠股四头肌病理形态;免疫组织化学法检测大鼠股四头肌磷酸化(p)-AMPK与PGC-1α蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠旷场实验站立次数与水平跨格数均显著减少(P<0.05);与模型组、假药饼灸组比较,隔药饼灸组与中药灌胃组大鼠站立次数与水平跨格数显著增加(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠悬尾实验挣扎次数显著减少(P<0.05),不动时间明显延长(P<0.05);与模型组比较,隔药饼灸组、假药饼灸组与中药灌胃组大鼠挣扎次数明显增加(P<0.05),不动时间显著缩短(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠血清中BLA、CXCL9及β-EP含量显著升高(P<0.05),股四头肌部分纤维结构破坏,胞核固缩、凝聚,股四头肌p-AMPK与PGC-1α蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,隔药饼灸组和中药灌胃组血清BLA、CXCL9及β-EP含量显著降低(P<0.05),肌纤维排列恢复,细胞间隙有所增大,股四头肌p-AMPK与PGC-1α蛋白表达显著升高(P<0.05),假药饼灸组肌纤维排列仍稀松杂乱;与假药饼灸组比较,隔药饼灸组血清BLA、CXCL9及β-EP含量显著降低(P<0.05),股四头肌p-AMPK与PGC-1α蛋白表达显著升高(P<0.05),中药灌胃组血清CXCL9、β-EP含量降低(P<0.05),股四头肌p-AMPK、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05)。结论:对CFS大鼠进行隔药饼灸治疗可调控血清BLA、CXCL9与β-EP含量,同时激活AMPK/PGC-1α信号通路,从而改善机体氧化应激状态,维持能量代谢的相对平衡。Objective To observe the effect of herbal cake-separated moxibustion(HCSM) on serum lactic acid(BLA) level and AMPK/PGC-1α signaling pathway in the quadriceps femoris in chronic fatigue syndrome(CFS) rats, so as to explore its mechanisms underlying improvement of CFS. Methods According to the random number table, 50 SD rats were divided into blank control, model, HCSM, sham HCSM and medication(herbal medicine gavage) groups, with 10 rats in each group. The CFS model was established by using chronic restraint and exhaustive swimming, alternately, once daily for 21 days. The herbal cake was made of Xiaoyao Powder(Mental Ease Powder, composed of [Danggui(Radix Angelicae Sinensis), Baishao(Radix Paeoniae Alba), Chaihu(Radix Bupleuri), Fuling(Poria), Baizhu(Rhizoma Atractylodis, Macrocephalae), etc.]. The HCSM was applied to “Shenque”(CV8), “Guanyuan “(CV4), bilateral “Zusanli”(ST36) and “Qimen”(LR14), 5 moxa-cones for each acupoint, once daily for 10 days. For sham HCSM, the excipient was instead of herbal cake, and the same 5 moxa-cones was given as the HCSM group. Rats of the medication group received gavage of Xiaoyao Powder suspension(60 mg·kg(-1))灌服。以上干预均每日1次,共10 d。旷场实验与悬尾实验评价各组大鼠行为学变化;ELISA法检测大鼠血清中BLA、趋化因子CXC配体9(CXCL9)及β-内啡肽(β-EP)含量;HE染色法观察大鼠股四头肌病理形态;免疫组织化学法检测大鼠股四头肌磷酸化(p)-AMPK与PGC-1α蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠旷场实验站立次数与水平跨格数均显著减少(P<0.05);与模型组、假药饼灸组比较,隔药饼灸组与中药灌胃组大鼠站立次数与水平跨格数显著增加(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠悬尾实验挣扎次数显著减少(P<0.05),不动时间明显延长(P<0.05);与模型组比较,隔药饼灸组、假药饼灸组与中药灌胃组大鼠挣扎次数明显增加(P<0.05),不动时间显著缩短(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠血清中BLA、CXCL9及β-EP含量显著升高(P<0.05),股四头肌部分纤维结构破坏,胞核固缩、凝聚,股四头肌p-AMPK与PGC-1α蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,隔药饼灸组和中药灌胃组血清BLA、CXCL9及β-EP含量显著降低(P<0.05),肌纤维排列恢复,细胞间隙有所增大,股四头肌p-AMPK与PGC-1α蛋白表达显著升高(P<0.05),假药饼灸组肌纤维排列仍稀松杂乱;与假药饼灸组比较,隔药饼灸组血清BLA、CXCL9及β-EP含量显著降低(P<0.05),股四头肌p-AMPK与PGC-1α蛋白表达显著升高(P<0.05),中药灌胃组血清CXCL9、β-EP含量降低(P<0.05),股四头肌p-AMPK、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05)。结论:对CFS大鼠进行隔药饼灸治疗可调控血清BLA、CXCL9与β-EP含量,同时激活AMPK/PGC-1α信号通路,从而改善机体氧化应激状态,维持能量代谢的相对平衡。
摘要:目的:观察针刺“三阴交”对微波辐射诱导的少弱精子症小鼠精子活力及睾丸B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的影响,探讨针刺改善少弱精子症的作用机制。方法:将BALB/C雄性小鼠随机分为空白组、模型组、针刺组,每组6只。采用频率为2 450 MHz、功率密度为40 mW/cm2的连续微波辐射1 h/d,共18 d,制备少弱精子症小鼠模型。针刺组造模同时每日手针针刺小鼠双侧“三阴交”各30 s,共18 d。采用计算机辅助精子分析法检测小鼠精子活力;HE染色法观察小鼠睾丸组织形态并计算Johnson评分;免疫荧光染色法检测小鼠睾丸Bcl-2、Bax和Caspase-3的阳性表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠精液中前向运动(PR)精子、非前向运动(NP)精子百分比及总活率均降低(P<0.05),小鼠睾丸组织Johnson评分及Bcl-2平均荧光强度降低(P<0.05),Bax、Caspase-3平均荧光强度升高(P<0.05);与模型组比较,针刺组小鼠精液中PR精子百分比及总活率均升高(P<0.05),睾丸组织Johnson评分及Bcl-2平均荧光强度升高(P<0.05),Bax、Caspase-3平均荧光强度降低(P<0.05)。空白组小鼠睾丸的生精小管未见异常,可见各级生精细胞和精子,支持细胞排列整齐;模型组生精小管变薄,生精细胞和精子数量减少甚至消失,支持细胞部分缺失;针刺组上述情况较模型组有所改善。结论:针刺“三阴交”对微波辐射诱导的少弱精子症小鼠精子活力有保护作用,其机制可能与针刺降低睾丸生精微环境中的Bax和Caspase-3,升高Bcl-2有关。Objective To observe the effect of acupuncture at “Sanyinjiao”(SP6) on sperm motility, testicular B cell lymphoma/leukelia-2(Bcl-2), Bcl-2 associated X protein(Bax), and Caspase-3 in mice with oligoasthenospermia induced by microwave radiation, so as to explore its underlying mechanisms in improving oligoasthenospermia. Methods Male BALB/C mice were randomly divided into control, model and acupuncture groups(n=6 in each group). The oligoasthenospermia model was established by continuous microwave irradiation with frequency of 2 450 MHz and power density of 40 mW/cm2的连续微波辐射1 h/d,共18 d,制备少弱精子症小鼠模型。针刺组造模同时每日手针针刺小鼠双侧“三阴交”各30 s,共18 d。采用计算机辅助精子分析法检测小鼠精子活力;HE染色法观察小鼠睾丸组织形态并计算Johnson评分;免疫荧光染色法检测小鼠睾丸Bcl-2、Bax和Caspase-3的阳性表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠精液中前向运动(PR)精子、非前向运动(NP)精子百分比及总活率均降低(P<0.05),小鼠睾丸组织Johnson评分及Bcl-2平均荧光强度降低(P<0.05),Bax、Caspase-3平均荧光强度升高(P<0.05);与模型组比较,针刺组小鼠精液中PR精子百分比及总活率均升高(P<0.05),睾丸组织Johnson评分及Bcl-2平均荧光强度升高(P<0.05),Bax、Caspase-3平均荧光强度降低(P<0.05)。空白组小鼠睾丸的生精小管未见异常,可见各级生精细胞和精子,支持细胞排列整齐;模型组生精小管变薄,生精细胞和精子数量减少甚至消失,支持细胞部分缺失;针刺组上述情况较模型组有所改善。结论:针刺“三阴交”对微波辐射诱导的少弱精子症小鼠精子活力有保护作用,其机制可能与针刺降低睾丸生精微环境中的Bax和Caspase-3,升高Bcl-2有关。