摘要:目的:观察电针预处理对链脲佐菌素(STZ)诱导的高血糖小鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响,探讨电针预处理对高血糖小鼠肾损伤的保护机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组及假电针组,每组20只。模型组、电针组及假电针组小鼠连续5 d腹腔注射STZ(50 mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1))复制高血糖模型。电针组小鼠在造模前取“足三里”“肾俞”行电针预处理7 d, 30 min/次,假电针组取相同穴位针刺透皮不通电。各组小鼠在造模完成3 d后,尾静脉采血测量禁食6 h后血糖值;HE染色法观察肾组织损伤程度;TUNEL染色法观察肾小管上皮细胞凋亡;Western blot法及免疫组织化学法检测肾组织中瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)表达及相关凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组血糖、肾小管上皮细胞凋亡比例及肾脏TRPC6、Caspase-3、Bax表达明显升高(P<0.001,P<0.000 1),肾组织损伤明显,Bcl-2表达、Bcl-2/Bax比值明显下降(P<0.000 1);与模型组及假电针组比较,电针组血糖、肾小管上皮凋亡细胞比例及肾脏TRPC6、Caspase-3、Bax表达下降(P<0.01,P<0.000 1,P<0.05,P<0.001),肾组织损伤程度较轻,Bcl-2表达、Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01,P<0.05,P<0.001)。HE染色结果显示模型组小鼠肾小球内毛细血管管腔异常扩张,近端小管刷状缘消失,而电针组则相对较轻。结论:电针预处理可抑制血糖升高,减少肾小管上皮细胞凋亡,其可能机制是下调TRPC6的表达以减少钙内流,使得Bcl-2/Bax比值升高,Caspase-3表达减少。Objective To observe the effect of electroacupuncture(EA) pretreatment on apoptosis of renal tubular epithelial cells in mice with hyperglycemia, so as to explore its mechanisms underlying protecting the kidney from hyperglycemia-induced injury. Methods Eighty male C57 BL/6 mice were equally and randomly divided into control, model, EA and sham EA groups. The hyperglycemia model was established by intraperitoneal injection of streptozocin(STZ, 50 mg·kg(-1))复制高血糖模型。电针组小鼠在造模前取“足三里”“肾俞”行电针预处理7 d, 30 min/次,假电针组取相同穴位针刺透皮不通电。各组小鼠在造模完成3 d后,尾静脉采血测量禁食6 h后血糖值;HE染色法观察肾组织损伤程度;TUNEL染色法观察肾小管上皮细胞凋亡;Western blot法及免疫组织化学法检测肾组织中瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)表达及相关凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组血糖、肾小管上皮细胞凋亡比例及肾脏TRPC6、Caspase-3、Bax表达明显升高(P<0.001,P<0.000 1),肾组织损伤明显,Bcl-2表达、Bcl-2/Bax比值明显下降(P<0.000 1);与模型组及假电针组比较,电针组血糖、肾小管上皮凋亡细胞比例及肾脏TRPC6、Caspase-3、Bax表达下降(P<0.01,P<0.000 1,P<0.05,P<0.001),肾组织损伤程度较轻,Bcl-2表达、Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01,P<0.05,P<0.001)。HE染色结果显示模型组小鼠肾小球内毛细血管管腔异常扩张,近端小管刷状缘消失,而电针组则相对较轻。结论:电针预处理可抑制血糖升高,减少肾小管上皮细胞凋亡,其可能机制是下调TRPC6的表达以减少钙内流,使得Bcl-2/Bax比值升高,Caspase-3表达减少。
摘要:目的:观察温和灸“大椎”对神经根型颈椎病(CSR)大鼠脊髓组织自噬与凋亡因子LC3、Bax蛋白及mRNA的影响,探讨运用温和灸治疗CSR的镇痛作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、温和灸组、温和灸+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组10只。采用渔线压迫颈局部神经根法制备CSR大鼠模型。于造模3 d后,温和灸组取“大椎”进行温和灸10 min治疗并予腹腔注射1 mL 0.9%氯化钠溶液,温和灸+3-MA组予温和灸“大椎”和腹腔注射1 mL 3-MA,模型组仅予腹腔注射1 mL 0.9%氯化钠溶液,均每日1次,连续干预7 d。治疗后进行大鼠步态障碍评分,并采用YLS-3E型痛分析仪测量机械痛阈,免疫组化法检测脊髓组织LC3、Bax的蛋白表达,RT-PCR法检测脊髓组织LC3、Bax mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型组步态障碍评分明显升高(P<0.01),机械痛阈明显降低(P<0.01),脊髓组织LC3蛋白及mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),Bax蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,温和灸组、温和灸+3-MA组步态障碍评分明显降低(P<0.01,P<0.05),机械痛阈明显升高(P<0.01,P<0.05),脊髓组织LC3蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05),Bax蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与温和灸+3-MA组比较,温和灸组步态障碍评分明显降低(P<0.05),机械痛阈明显升高(P<0.05),脊髓组织LC3蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05),Bax蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:温和灸“大椎”可有效改善CSR大鼠的神经病理性疼痛,其作用机制可能与上调LC3的自噬水平,从而抑制Bax促凋亡蛋白表达,减少细胞凋亡,修复神经损伤有关。
摘要:目的:观察艾灸对佐剂性关节炎(AA)大鼠脊髓中N-甲基-D天冬氨酸受体-一氧化氮-环鸟苷酸(NMDA-NO-cGMP)通路的影响,探讨艾灸改善类风湿性关节炎(RA)炎性痛的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、艾灸+NMDA受体拮抗剂(AP-5)组和艾灸+NMDA受体激动剂(NMDA)组,每组20只。采用风寒湿环境因素结合右后足跖注射完全弗氏佐剂建立AA大鼠模型。艾灸组采用艾条悬灸“足三里”“肾俞”,两穴交替使用;艾灸+AP-5组和艾灸+NMDA组分别给予腹腔注射AP-5(0.7 mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1))和NMDA(5 mg·kg(-1))和NMDA(5 mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1))后进行与艾灸组相同的干预;3组均每日1次,共干预15 d。造模前后及干预后测定大鼠右后足底机械痛阈(PWT);荧光定量PCR法和Western blot法检测脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA和蛋白的表达;ELISA法检测脊髓组织中cGMP的含量;比色法和硝酸还原酶法分别检测脊髓组织中NOS的活性和NO的含量。结果:造模后,与正常组比较,其余各组右后足底PWT均显著降低(P<0.01)。干预后,与正常组比较,模型组右后足底PWT显著降低(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及cGMP、NO含量和NOS活性均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各干预组PWT明显升高(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及cGMP、NO含量和NOS活性均显著降低(P<0.01,P<0.05)。与艾灸组比较,艾灸+AP-5组PWT明显升高(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及NO含量均显著降低(P<0.01,P<0.05);艾灸+NMDA组PWT显著降低(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及cGMP、NO含量和NOS活性均明显升高(P<0.01)。结论:艾灸可改善AA大鼠的炎性痛反应,其作用机制可能与下调脊髓组织中NMDA-NO-cGMP通路的功能有关。Objective To observe the effect of moxibustion on pain and N-methyl-D aspartic acid receptor/nitric oxide/cyclic guanosine monophosphate(NMDA-NO-cGMP) signaling pathway in the spinal cord of rats with adjuvant arthritis(AA), so as to explore its underlying mechanisms in relieving inflammatory pain of rheumatoid arthritis(RA). Methods SD rats were randomly divided into normal, model, moxibustion(Moxi), Moxi +NMDA receptor antagonist AP-5(Moxi+AP-5) and Moxi +NMDA receptor agonist(NMDA) groups, with 20 rats in each group. The AA model was established by placing the rats in a wind, cold and damp environment for 12 h, once daily for 20 days and by injection of complete Freund's adjuvant into the right hind paw. Rats of the three Moxi groups received ignited moxa-stick stimulation of “Zusanli”(ST36) and “Shenshu”(BL23) alternately for 20 min, once a day for 15 days. The Moxi + AP-5 group and Moxi +NMDA group received intraperitoneal injection of AP-5(0.7 mg·kg(-1))后进行与艾灸组相同的干预;3组均每日1次,共干预15 d。造模前后及干预后测定大鼠右后足底机械痛阈(PWT);荧光定量PCR法和Western blot法检测脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA和蛋白的表达;ELISA法检测脊髓组织中cGMP的含量;比色法和硝酸还原酶法分别检测脊髓组织中NOS的活性和NO的含量。结果:造模后,与正常组比较,其余各组右后足底PWT均显著降低(P<0.01)。干预后,与正常组比较,模型组右后足底PWT显著降低(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及cGMP、NO含量和NOS活性均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各干预组PWT明显升高(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及cGMP、NO含量和NOS活性均显著降低(P<0.01,P<0.05)。与艾灸组比较,艾灸+AP-5组PWT明显升高(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及NO含量均显著降低(P<0.01,P<0.05);艾灸+NMDA组PWT显著降低(P<0.01),脊髓组织中iNOS mRNA和蛋白的表达及cGMP、NO含量和NOS活性均明显升高(P<0.01)。结论:艾灸可改善AA大鼠的炎性痛反应,其作用机制可能与下调脊髓组织中NMDA-NO-cGMP通路的功能有关。