摘要:目的:基于肥大细胞/瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)调控功能性消化不良(FD)内脏高敏感,探讨电针“足三里”对FD的干预机制。方法:新生10 d的SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、酮替芬组、足三里组,每组15只。采用碘乙酰胺联合夹鼠尾法制备FD大鼠模型。酮替芬组予腹腔注射酮替芬,1 mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1),注射14 d;足三里组予电针双侧“足三里”穴,1次/d,连续14 d。采用胃内球囊容积/压力(mL/mm Hg)的变化、腹部撤退反射(AWR)评分作为大鼠内脏高敏感评价指标;甲苯胺蓝染色法观察胃黏膜肥大细胞数量及脱颗粒情况;免疫荧光染色法观察胃组织TRPV1的阳性表达;Western blot法检测胃组织TRPV1和蛋白酶激活受体2(PAR2)蛋白表达;ELISA法检测胃组织P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量。结果:与正常对照组比较,模型组胃内球囊压力在50、60、70 mm Hg时胃内球囊容积/压力降低(P<0.01),胃内球囊压力为40、50、60、70 mm Hg时AWR评分升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,足三里组胃内球囊压力在50、60、70 mm Hg时胃内球囊容积/压力升高(P<0.01,P<0.05)、AWR评分降低(P<0.05,P<0.01),酮替芬组胃内球囊压力在60、70 mm Hg时AWR评分降低(P<0.01,P<0.05);与酮替芬组比较,足三里组胃内球囊压力在70 mm Hg时胃内球囊容积/压力升高(P<0.05)。正常对照组胃黏膜肥大细胞形态规则;模型组胃黏膜肥大细胞明显增多且脱颗粒状态明显;足三里组和酮替芬组胃黏膜肥大细胞明显减少且脱颗粒情况不明显。与正常对照组比较,模型组胃组织PAR2、TRPV1蛋白表达水平和SP、CGRP含量均升高(P<0.01);与模型组比较,足三里组和酮替芬组胃组织PAR2、TRPV1蛋白表达水平和SP、CGRP含量均降低(P<0.01,P<0.05);与酮替芬组比较,足三里组胃组织SP、CGRP含量降低(P<0.05)。结论:电针“足三里”可能是通过降低胃黏膜肥大细胞活化和脱颗粒程度,调控胃组织PAR2、TRPV1蛋白的表达,降低传递伤害性痛觉信息的神经肽SP、CGRP的释放,起到对FD大鼠内脏高敏感的干预作用。Objective To explore the interventional mechanism of electroacupuncture(EA) of “Zusanli”(ST36)based on the involvement of mast cells/transient receptor potential vanilloid type1(TRPV1) signaling pathway in relieving visceral hypersensitivity in functional dyspepsia(FD) rats. Methods Sixty SD rats(half male and half female, 10 days in age) were randomly divided into normal control, model, medication(ketotifen) and EA groups, with 15 rats in each group. The FD model was established by gavage of iodoacetamide combined with tail clamping(stress stimulation). Rats of the medication group received intraperitoneal injection of ketotifen(1 mg·kg(-1),注射14 d;足三里组予电针双侧“足三里”穴,1次/d,连续14 d。采用胃内球囊容积/压力(mL/mm Hg)的变化、腹部撤退反射(AWR)评分作为大鼠内脏高敏感评价指标;甲苯胺蓝染色法观察胃黏膜肥大细胞数量及脱颗粒情况;免疫荧光染色法观察胃组织TRPV1的阳性表达;Western blot法检测胃组织TRPV1和蛋白酶激活受体2(PAR2)蛋白表达;ELISA法检测胃组织P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量。结果:与正常对照组比较,模型组胃内球囊压力在50、60、70 mm Hg时胃内球囊容积/压力降低(P<0.01),胃内球囊压力为40、50、60、70 mm Hg时AWR评分升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,足三里组胃内球囊压力在50、60、70 mm Hg时胃内球囊容积/压力升高(P<0.01,P<0.05)、AWR评分降低(P<0.05,P<0.01),酮替芬组胃内球囊压力在60、70 mm Hg时AWR评分降低(P<0.01,P<0.05);与酮替芬组比较,足三里组胃内球囊压力在70 mm Hg时胃内球囊容积/压力升高(P<0.05)。正常对照组胃黏膜肥大细胞形态规则;模型组胃黏膜肥大细胞明显增多且脱颗粒状态明显;足三里组和酮替芬组胃黏膜肥大细胞明显减少且脱颗粒情况不明显。与正常对照组比较,模型组胃组织PAR2、TRPV1蛋白表达水平和SP、CGRP含量均升高(P<0.01);与模型组比较,足三里组和酮替芬组胃组织PAR2、TRPV1蛋白表达水平和SP、CGRP含量均降低(P<0.01,P<0.05);与酮替芬组比较,足三里组胃组织SP、CGRP含量降低(P<0.05)。结论:电针“足三里”可能是通过降低胃黏膜肥大细胞活化和脱颗粒程度,调控胃组织PAR2、TRPV1蛋白的表达,降低传递伤害性痛觉信息的神经肽SP、CGRP的释放,起到对FD大鼠内脏高敏感的干预作用。
摘要:目的:观察温和灸对动脉粥样硬化(AS)家兔血脂水平、主动脉弓部组织病理形态结构、胸主动脉沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨温和灸治疗AS的作用机制。方法:将家兔随机分为空白组12只、模型组11只、温和灸组11只、温和灸+阻断剂组(阻断剂组)12只。采用高脂饲料饲养8周结合免疫反应损伤制备AS家兔模型。温和灸组选取“膻中”“神阙”及双侧“内关”“血海”穴进行艾灸,每次30 min,每周3次,连续4周。阻断剂组在施灸前30 min腹腔注射SIRT1阻断剂EX527(5 mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1)),艾灸干预同温和灸组,每周3次,连续4周。采用酶法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,比色法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;苏丹Ⅳ染色法观察家兔主动脉弓部组织病理形态结构;Western blot和实时荧光定量-PCR法检测胸主动脉SIRT1、NF-κB蛋白和mRNA表达量。结果:与空白组比较,模型组家兔血清TG、TC、LDL-C含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01),主动脉弓部组织结构界限不清,脂质浸润明显,胸主动脉SIRT1 mRNA表达量显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白和mRNA表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,温和灸组血清TG、TC、LDL-C含量降低(P<0.01,P<0.05),HDL-C含量升高(P<0.05),主动脉弓部组织结构较清晰,脂质浸润明显减轻,胸主动脉SIRT1蛋白和mRNA表达量升高(P<0.05,P<0.01), NF-κB蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.01);阻断剂组各项指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与温和灸组比较,阻断剂组血清TG、TC、LDL-C含量升高(P<0.01,P<0.05),HDL-C含量降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论:温和灸能改善血脂水平,减轻内皮损伤,促进内膜修复,其作用机制可能与调控SIRT1/NF-κB信号通路有关。Objective To observe the effect of mild moxibustion on blood lipid, histopathological structure of the aortic arch, thoracic aortic silent information regulator 1(SIRT1)/nuclear factor κB(NF-κB) signaling pathway in atherosclerosis(AS) rabbits, so as to explore its underlying mechanisms in improving AS. Methods Sixty male rabbits were randomly divided into control group(n=12), model group(n=11), mild moxibustion group(n=11), mild moxibustion + blocker(blocker) group(n=12). The AS model was established by feeding the rabbits with high-fat forage for 8 weeks, followed by immune response damage. Mild moxibustion was applied to “Danzhong”(CV17), “Shenque”(CV8) and “Neiguan”(PC6, bilateral) and “Xuehai”(SP10, bilateral) for 30 min, once daily, 3 times a week for 4 weeks. Rabbits of the blocker group received intraperitoneal injection of EX527(a selective inhibitor of SIRT1, 5 mg·kg(-1)),艾灸干预同温和灸组,每周3次,连续4周。采用酶法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,比色法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;苏丹Ⅳ染色法观察家兔主动脉弓部组织病理形态结构;Western blot和实时荧光定量-PCR法检测胸主动脉SIRT1、NF-κB蛋白和mRNA表达量。结果:与空白组比较,模型组家兔血清TG、TC、LDL-C含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01),主动脉弓部组织结构界限不清,脂质浸润明显,胸主动脉SIRT1 mRNA表达量显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白和mRNA表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,温和灸组血清TG、TC、LDL-C含量降低(P<0.01,P<0.05),HDL-C含量升高(P<0.05),主动脉弓部组织结构较清晰,脂质浸润明显减轻,胸主动脉SIRT1蛋白和mRNA表达量升高(P<0.05,P<0.01), NF-κB蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.01);阻断剂组各项指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与温和灸组比较,阻断剂组血清TG、TC、LDL-C含量升高(P<0.01,P<0.05),HDL-C含量降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论:温和灸能改善血脂水平,减轻内皮损伤,促进内膜修复,其作用机制可能与调控SIRT1/NF-κB信号通路有关。