摘要:目的:观察艾灸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠结肠组织miR-345-3p、miR-216a-5p、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响,探讨艾灸治疗IBS-D的抗炎机制。方法:SD幼鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、吡咯烷二硫代甲酸铵盐(PDTC)组,每组12只。采用新生仔鼠母子分离联合醋酸灌肠刺激联合慢性束缚法复制IBS-D大鼠模型。艾灸组艾灸“天枢”“上巨虚”,每次20 min,每天1次,治疗7 d。PDTC组腹腔注射PDTC(50 mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1)),共治疗7 d。观察各组幼鼠体质量、稀便率和腹部回缩反射(AWR)最小容量阈值;HE染色法观察各组幼鼠结肠黏膜层病理形态;ELISA法检测各组幼鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;荧光定量PCR法检测各组幼鼠结肠组织中miR-345-3p、miR-216a-5p、NF-κB p65 mRNA表达水平;免疫荧光法检测各组幼鼠结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65表达水平。结果:与正常组比较,模型组稀便率升高(P<0.01),体质量、AWR最小容量阈值降低(P<0.01),结肠组织黏膜存在轻度炎性反应,血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量升高(P<0.01),IL-4含量降低(P<0.01),结肠组织miR-345-3p、miR-216a-5p相对表达量降低(P<0.01),NF-κB p65 mRNA相对表达量升高(P<0.01),结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65免疫荧光平均吸光度值升高(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组和PDTC组稀便率降低(P<0.01),体质量、AWR最小容量阈值升高(P<0.01),结肠组织黏膜炎性反应减轻,血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低(P<0.01),IL-4含量升高(P<0.01),结肠组织miR-345-3p、miR-216a-5p相对表达量升高(P<0.05),NF-κB p65 mRNA相对表达量降低(P<0.01),结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65免疫荧光平均吸光度值降低(P<0.01)。与艾灸组比较,PDTC组血清IL-6含量降低(P<0.01)。结论:艾灸可以减轻IBS-D大鼠肠道炎性反应水平,降低内脏高敏感性,其机制可能与提高结肠组织miR-345-3p、miR-216a-5p表达水平,抑制NF-κB p65表达水平,从而降低炎性因子水平有关。Objective To observe the effect of moxibustion on the expression of miR-345-3p, miR-216a-5p and nuclear factor-κB p65(NF-κB p65) in colonic tissue of rats with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome(IBS-D), so as to explore its anti-inflammatory mechanism in relieving IBS-D. Methods SD rats were randomly divided into normal control(n=12), model(n=12), moxibustion(n=12) and ammonium pyrrolidine dithiocarbamate(PDTC,n=12) groups. The IBS-D model was established by neonatal mother-child separation combined with acetic acid enema stimulation and chronic binding methods. The rats in the moxibustion group received moxibustion stimulation of “Tianshu”(ST25) and “Shangjuxu”(ST37) for 20 min, once a day, for 7 days, and those of the PDTC group received intraperitoneal injection of PDTC(50 mg·kg(-1)),共治疗7 d。观察各组幼鼠体质量、稀便率和腹部回缩反射(AWR)最小容量阈值;HE染色法观察各组幼鼠结肠黏膜层病理形态;ELISA法检测各组幼鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;荧光定量PCR法检测各组幼鼠结肠组织中miR-345-3p、miR-216a-5p、NF-κB p65 mRNA表达水平;免疫荧光法检测各组幼鼠结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65表达水平。结果:与正常组比较,模型组稀便率升高(P<0.01),体质量、AWR最小容量阈值降低(P<0.01),结肠组织黏膜存在轻度炎性反应,血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量升高(P<0.01),IL-4含量降低(P<0.01),结肠组织miR-345-3p、miR-216a-5p相对表达量降低(P<0.01),NF-κB p65 mRNA相对表达量升高(P<0.01),结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65免疫荧光平均吸光度值升高(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组和PDTC组稀便率降低(P<0.01),体质量、AWR最小容量阈值升高(P<0.01),结肠组织黏膜炎性反应减轻,血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低(P<0.01),IL-4含量升高(P<0.01),结肠组织miR-345-3p、miR-216a-5p相对表达量升高(P<0.05),NF-κB p65 mRNA相对表达量降低(P<0.01),结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65免疫荧光平均吸光度值降低(P<0.01)。与艾灸组比较,PDTC组血清IL-6含量降低(P<0.01)。结论:艾灸可以减轻IBS-D大鼠肠道炎性反应水平,降低内脏高敏感性,其机制可能与提高结肠组织miR-345-3p、miR-216a-5p表达水平,抑制NF-κB p65表达水平,从而降低炎性因子水平有关。
摘要:目的:观察艾灸预处理对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢功能、生育力及卵巢颗粒细胞凋亡的影响,探讨艾灸预处理对POI大鼠卵巢功能的保护作用及其抗凋亡效应机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组和预灸组,每组14只。预灸组造模前予14 d温和灸干预,“肾俞”和“关元”“中脘”两组穴位隔日交替进行,每日1次,每次10 min。采用雷公藤多苷混悬液75 mg·kg(-1)·d(-1)·d(-1)灌胃14 d制备POI大鼠模型。观察大鼠动情周期、妊娠率和胚胎数量,称量卵巢湿重并计算卵巢指数;HE染色观察卵巢组织形态学变化及卵泡计数;ELISA法检测大鼠血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗苗勒管激素(AMH)含量;TUNEL染色观察卵巢颗粒细胞凋亡率;免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法分别检测卵巢组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9蛋白和mRNA表达水平。结果:与空白组相比,模型组动情周期紊乱,妊娠率和胚胎数量降低(P<0.01);卵巢湿重及卵巢指数降低(P<0.01),总卵泡数及各级卵泡数量均减少(P<0.01,P<0.05),闭锁卵泡数量增多(P<0.01);血清E_2、AMH含量降低(P<0.01),FSH、LH含量升高(P<0.01);卵巢细胞凋亡率升高(P<0.01);卵巢Caspase-3和Caspase-9蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组相比,预灸组动情周期紊乱大部分恢复正常(P<0.01),妊娠率和胚胎数量升高(P<0.01);卵巢湿重升高(P<0.01),总卵泡数及初级卵泡数量增多(P<0.05),闭锁卵泡数减少(P<0.01);血清AMH含量升高(P<0.05),FSH含量降低(P<0.05);卵巢细胞凋亡率降低(P<0.05);卵巢Caspase-3和Caspase-9蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:艾灸预处理可以减少卵巢颗粒细胞凋亡,有效保护POI大鼠卵巢功能,提高生育力。Objective To observe the effects of moxibustion preconditioning on ovarian function, fertility and ovarian granulosa cell apoptosis in rats with premature ovarian insufficiency(POI), so as to investigate its underlying mechanism in improving POI. Methods Forty-two female SD rats with two complete estrous cycles were randomly divided into control group, model group and pre-moxibustion group, with 14 rats in each group. The pre-moxibustion group was pretreated with mild moxibustion for 14 days before POI model establishment at 1) “Guanyuan”(CV4) and “Zhongwan”(CV12) and 2) bilateral “Shenshu”(BL23) as two sets of acupoints on alternate days, once each day, for 10 min each acupoint. After 14-day mild moxibustion intervention, 75 mg·kg(-1)灌胃14 d制备POI大鼠模型。观察大鼠动情周期、妊娠率和胚胎数量,称量卵巢湿重并计算卵巢指数;HE染色观察卵巢组织形态学变化及卵泡计数;ELISA法检测大鼠血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗苗勒管激素(AMH)含量;TUNEL染色观察卵巢颗粒细胞凋亡率;免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法分别检测卵巢组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9蛋白和mRNA表达水平。结果:与空白组相比,模型组动情周期紊乱,妊娠率和胚胎数量降低(P<0.01);卵巢湿重及卵巢指数降低(P<0.01),总卵泡数及各级卵泡数量均减少(P<0.01,P<0.05),闭锁卵泡数量增多(P<0.01);血清E_2、AMH含量降低(P<0.01),FSH、LH含量升高(P<0.01);卵巢细胞凋亡率升高(P<0.01);卵巢Caspase-3和Caspase-9蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组相比,预灸组动情周期紊乱大部分恢复正常(P<0.01),妊娠率和胚胎数量升高(P<0.01);卵巢湿重升高(P<0.01),总卵泡数及初级卵泡数量增多(P<0.05),闭锁卵泡数减少(P<0.01);血清AMH含量升高(P<0.05),FSH含量降低(P<0.05);卵巢细胞凋亡率降低(P<0.05);卵巢Caspase-3和Caspase-9蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:艾灸预处理可以减少卵巢颗粒细胞凋亡,有效保护POI大鼠卵巢功能,提高生育力。
摘要:目的:探讨“夹脊”电针早期干预通过调控Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路缓解肌萎缩侧索硬化症(ALS)小鼠疾病进展的作用机制。方法:将经PCR鉴定后超氧化物歧化酶1(SOD1)(G93A)基因突变的ALS-SOD1(G93A)基因突变的ALS-SOD1(G93A)小鼠随机分为模型组、60 d电针组和90 d电针组,每组18只;18只ALS-SOD1(G93A)小鼠随机分为模型组、60 d电针组和90 d电针组,每组18只;18只ALS-SOD1(G93A)阴性小鼠作为对照组。60 d电针组和90 d电针组分别在小鼠60日龄和90日龄时予双侧腰(L)1—L2、L5—L6“夹脊”穴电针刺激,20 min/次,2次/周,连续治疗4周。悬尾实验判断小鼠发病期及生存期;转棒疲劳实验评估小鼠后肢运动功能;尼氏染色法观察小鼠腰髓前角尼氏小体数量;免疫组织化学法观察小鼠腰髓前角离子钙结合衔接分子1(Iba-1)蛋白表达水平;Western blot法检测小鼠腰髓组织中TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的相对表达量。结果:模型组发病时间为(90.17±0.90) d,与对照组比较,生存期缩短(P<0.01),转棒时间自发病后明显降低(P<0.05),腰髓前角尼氏小体数量减少(P<0.01),腰髓Iba-1、TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,60 d电针组发病时间推迟(P<0.01),转棒时间延长(P<0.05);60 d和90 d电针组生存期均延长(P<0.01),腰髓前角尼氏小体数量均增加(P<0.01,P<0.05),腰髓Iba-1、TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达水平均降低(P<0.01,P<0.05)。且60 d电针组效果优于90 d电针组(P<0.01,P<0.05)。结论:“夹脊”电针早期干预延缓ALS-SOD1(G93A)阴性小鼠作为对照组。60 d电针组和90 d电针组分别在小鼠60日龄和90日龄时予双侧腰(L)1—L2、L5—L6“夹脊”穴电针刺激,20 min/次,2次/周,连续治疗4周。悬尾实验判断小鼠发病期及生存期;转棒疲劳实验评估小鼠后肢运动功能;尼氏染色法观察小鼠腰髓前角尼氏小体数量;免疫组织化学法观察小鼠腰髓前角离子钙结合衔接分子1(Iba-1)蛋白表达水平;Western blot法检测小鼠腰髓组织中TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的相对表达量。结果:模型组发病时间为(90.17±0.90) d,与对照组比较,生存期缩短(P<0.01),转棒时间自发病后明显降低(P<0.05),腰髓前角尼氏小体数量减少(P<0.01),腰髓Iba-1、TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,60 d电针组发病时间推迟(P<0.01),转棒时间延长(P<0.05);60 d和90 d电针组生存期均延长(P<0.01),腰髓前角尼氏小体数量均增加(P<0.01,P<0.05),腰髓Iba-1、TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达水平均降低(P<0.01,P<0.05)。且60 d电针组效果优于90 d电针组(P<0.01,P<0.05)。结论:“夹脊”电针早期干预延缓ALS-SOD1(G93A)小鼠疾病进展效果优于发病后干预,且早期干预可推迟ALS-SOD1(G93A)小鼠疾病进展效果优于发病后干预,且早期干预可推迟ALS-SOD1(G93A)小鼠发病时间,其作用机制可能与抑制小胶质细胞过度活化、下调TLR4/NF-κB信号通路有关。Objective To observe the effect of early electroacupuncture(EA) intervention on Toll-like receptor 4(TLR4)/nuclear factor-κB(NF-κB) signaling pathway in mice with amyotrophic lateral sclerosis(ALS), so as to explore its mechanisms underlying alleviation of ALS. Methods Fifty-four ALS(ALS-SOD1(G93A)小鼠发病时间,其作用机制可能与抑制小胶质细胞过度活化、下调TLR4/NF-κB信号通路有关。